ИСТИНА

Множество патологий, начиная от воспаления и заканчивая нейродегенеративными заболеваниями, сопровождаются неконтролируемым высвобождением активных форм кислорода, повреждающих окружающие ткани. На модели контузионной травмы спинного мозга крыс мы показали, что введение антиоксидантных ферментов в составе полиэлектролитных комплексов через 30 минут после нанесения травмы значительно ускоряет процесс восстановления динамики произвольных движений у животных. К сожалению, на синтез таких наночастиц влияет множество факторов: концентрации исходных реагентов, их соотношение, время добавления реагентов, режим перемешивания. Поэтому актуальным является исследование, направленное на установление таких закономерностей. Антиоксидантный фермент (супероксиддисмутаза), поликатион (протамин), полианион (полиглутаминовая кислота-полиэтиленгликоль) растворяли в HEPES буфере с 0,15 М NaCl. К ферменту при перемешивании по каплям добавляли протамин. Полученный раствор перемешивали в течение 30 минут, затем при перемешивании по каплям добавляли полианион. Полученный раствор оставляли при температуре 4°С на время 0-60 минут. Затем добавляли сшивающий агент и оставляли на ночь. Очистку проводили на центрифужных фильтрах Millipore 50 кДа. Эффективность синтеза оценивали по выходу реакции с помощью BCA анализа и по активности фермента с помощью пирогаллолового теста. Найдено, что главным фактором, влияющим на результат, является время после добавления полианиона. Подбор оптимального времени позволяет в несколько раз увеличить выход по белку (с 20% до 70%) и уменьшить потери ферментативной активности с 90% до 30%. Остальные параметры влияют на эффективность выход по белку и потери ферментативной активности в пределах 10-20%. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере по программе «УМНИК» и гранта ОПТЭК.