ИСТИНА

Цитохромоксидаза (ЦО) - это терминальный электронный акцептор (комплекс IV) дыхательной электрон-транспортной цепи, в котором происходит восстановление кислорода до воды электронами, поступающими от цитохрома с. Дополнительно, ЦО катализирует активный протонный транспорт через внутреннюю митохондриальную мембрану. Цитохромоксидаза, таким образом, генерирует трансмембранную разность протонных электрохимических потенциалов, необходимую для синтеза АТФ. Детальный механизм работы ЦО неизвестен. Проблемами, требующими изучения, являются кинетика и постадийный механизм миграции электрона от цитохрома с через CuA/heme а в двухядерный кислород- редуктазный центр, сопровождающийся сопряженным транспортом протонов. Редокс- превращения кофакторов ЦО сопровождаются изменениями спектра поглощения, которые можно отследить с помощью кинетической спектрофотометрии. Для инициации электронного транспорта в цитохромоксидазе мы использовали цитохром с, меченый TUPS (тиоредо-пирен- трисульфонат) [1,2]. С помошью многоканального оптического анализатора и возбуждения третьей гармоники NdYAG лазера мы исследовали перенос электрона с триплетного состояния TUPS на гем цитохрома с и далее на гем а цитохромоксидазы. Квантовый выход фотоиндуцированного переноса электрона и получаемая из измеряемых разностных спектров информация значительно выше в случае использования TUPS-цитохрома с, чем более распространенных рутениевых комплексов. Это позволило нам проследить образование и превращение различных форм TUPS-цитохромс-цитохромоксидазной системы, соотвествующих разным редокс- конфигурациям. Исследовав pH-зависимость соотношения восстановленного гема а и гема цитохрома с, мы идентифицировали эффект протон-обменивающего сайта цитохромоксидазы на электронный транспорт и опрделили его pK. 1. A.B.Kotlyar, N.Borovok, M.Hazani, Biochemistry 1997 36,15823-15827, 15828-15833. 2. J.A.Szundi, N.Cappuccio, A.B.Borovok, A.Kotlyar, O.Einarsdуttir, Biochemistry 2001, 40,2186-2193.