ИСТИНА

С помощью фотовосстановления трис(бипиридил)рутением феррильной формы фермента были исследованы разрешенные во времени электрогенные реакции в цитохромоксидазе из Rhodobacter sphaeroides, сопряженные с переносом 4-го электрона. Сравнивались три мутации в протонном D-канале: E286D (верхняя часть D-канала), D132N (входная часть D-канала) и двойной мутант E286D/D132N. Наряду с быстрой электрогенной фазой (15 мкс), наблюдавшейся во всех изучавшихся формах, в цитохромоксидазе дикого типа наблюдались две электрогенные, протонные, чувствительные к цианиду фазы: промежуточная (0.4 мс) и медленная (1.5 мс). В цитохромоксидазе с мутацией E286D разрешалась только медлення фаза. Напротив, в случае мутации D132N специфически убиралась медленная фаза, а промежуточная (0.4мс) фаза лишь частично уменьшалась по амплитуде. Двойная замена E286D/D132N привела к исчезновению медленной протонной фазы, как и в случае D132N, что позволило наблюдать в двойном мутанте промежуточную фазу такой же амплитуды, что и в D132N, которая была однако замедлена в 4-5 раз по сравнению с диким типом или D132N. Это замедление объясняет отсутствие промежуточной фазы в мутанте E286D, та как она по-видимому совпадает во времени с медленной фазой. Эти данные показывают, что остаток E286 специфически вовлечен в начальный электрогенный протонный перенос (промежуточная протонная фаза) в F-в-O переходе.