|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Микроскопическая техникаучебный курс
- Автор: Якушев А.В.
- Год создания: 2010
- Организация: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Описание: Введение. Значение светового микроскопа для биологии, микробиологии и почвоведения. Понятия: оптическое разрешение, микроскоп, микроскопия, прос¬той и сложный микроскоп. Знакомство с конструкцией микроскопа «Микмед-5». Настройка света по принципу Келера (безартефактная микроскопия), настройка фазово-контрасного освещения и темнопольного освещения в проходящем свете с помощью фазово-контрастного устройства. Световой микроскоп и его принадлежности. Лучшие фирмы-производители световых микроскопов. Знакомство с микроскопами МБИ-1, Биолам, Микмед-2, Яновал. Основные элементы микроскопа. 1) Механическая часть: рукоятки грубой и тонкой фокусировки винта, макро- и микровинт. Предметные столики с препаратодержателям и препаратоводителями, клеммы (лапки). Револьвер. 2) Оптическая часть. Демонстрация различных микрообъективов. Конструкции объективов: фронтальная и коррекционные линзы. Понятия о сферической и хроматической аберрации. Астегматизм. Кома. Технические особенности микрообъективов: ахроматы, планахроматы, апохроматы, стигмахроматы, микрофлюары, планапохроматы, fluar, epiplan-neofluar. Парфокальная высота и парафокальность объективов. Характеристики объективов выгравированы на их оправе - для чего они нужны. Объективы слабые - сухие и сильные –иммерсионные (водная иммерсия и масляная иммерсия). Расчет увеличения микроскопа. Числовая апертура объектива и расчёт максимального полезного увеличения микроскопа. Разрешающая способность микроскопа (число Аббе). Окуляры Гюйгенса, компенсационные, широкопольные. Как определить оптимальную величину увеличения окуляра. Тубусы (знакомство с тубусом переменной длины), бинокулярные (АУ-12) и тринокулярные (фото, видео) насадки. Осветитель для исследовательского микроскопа. Полевая диафрагма - её функции. Расчёт диаметр светящегося тела источника света. Источники света: солнце, галогеновые лампы, светодиоды. Демонстрация работы внешних осветителей ОИ-19, ОИ-24, ОИ-31. Демонстрация работы оптических безартефактных конденсоров: сухие и иммерсионные, слабые (по типу очкового стекла), сильные (конденсор Аббе), универсальные (с откидной фронтальной линзой). Классический алгоритм настройки света по Келеру. Фазовый контраст: принцип действия, положительный и отрицательный (тёмнопольный или аноптральный), Различные конструкции фазовых конденсоров - демонстрация настройки и работы устройств КФ-4, КФ-1, КФ-5. Число фазовых колец: Ф-1, Ф-2, Ф-3. Принцип тёмного поля, эффект Тиндаля. Темнопольные конденсоры: сильные - иммерсионные (ОИ-13), слабые (ОИ-10, ОИ-2). Требования при работе с темнопольным конденсором. Объективы с изменяемой числовой аппертурой, и аппертурная диафрагма для иммерсионных объективов – воронка. Демонстрация работы конденсора косого освещения (ОИ-14). Принадлежности к микроскопам. Опак-иллюминатор (ОИ-1) и микроскопия в отражённом свете. Требования к покровным и предметным стёклам. Как визуально проверить качество покровных и предметных стёкл. Иммерсионные жидкости. Светофильтры: жидкостные, абсорбционные, интерференционные, защитные (теплозащитные, светоослабляющие, от ультрафиолета), компенсационные (дневной свет, матовое стекло), контрастирующие (зёлёный), увеличивающие разрешение (синий) и селективные (возбуждающие и запирающие). Подсчет клеток микроорганизмов с помощью счётной камеры Горяева-Тома. Работа с объект-микрометром (ОМО), окуляр - микрометром (МОВ-1). Рисовальный аппарат Аббе (РА-4). Параболическое и плоское зеркало для микроскопов с внешним источником света. Микрофотографирование и микросъемка. Знакомство со специализированной программой анализа микроскопического изображения Image-Pro Plus 7.0. Приготовление препаратов. Типы препаратов: сухие - вмещающие, постоянные - временные, прижизненные – фиксированные (способы физической и химической фиксации). Препарат: «капля», «раздавленная капля», «висячая капля», «мазок», «срез», «микрокультура», «отпечаток». Окраска витальная (метиленовый синий), простая и дифференциальная. Потравные красители. Позитивные и негативные красители. Красители в микробиологии, классификации красителей: 1.по химическому составу, 2. по использованию - основные (фуксин основной, кристаллический фиолетовый), кислые (эритрозин), нейтральные (cудан III). Как быстро отличить кислый краситель от основного. Как улучшить окрашивание. Цитохимические методы исследования клеток микроорганизмов. Выявление кислотоустойчивости бактерий. Теория окраски бактерий по Граму. Знакомство с окраской бактерий по Граму. Фуксин Пфейфера, фуксин Циля. Окраска гликогена. Окраска капсул методом Бурри. Люминесцентная микроскопия. Люминесценция: хемилюминесценция, радиолюминесценция, фотолюминесценция. Флюоресценция и фосфоресценция. Собственная (первичная) и наведенная (вторичная) флюресценция. Закона Стокса – Ломмеля. Следствие закона Стокса. Закон Вавилова. Преимущество и недостатки люминесцентной микроскопии. Способы окрашивания красителями (флюорохромами): основные (DAPI, ФИТЦ, Fun 1, SYTO 9, акридин оранжевый, пропидиум йодид, этидиум бромид), кислые (конго красный, флюоресцеин, калькофлюор белый, эритрозин), нейтральные (нейтральный красный, фосфин 3R). Метаболизируемые красители: флюоресцеин диацетат, сульфофлюоресцеин диацетат. Гасители оюминесценции. Метод in situ-гибридизации с рРНК-специфичными флюоресцентномеченными олигонуклиотидными зондами (FISH). Фиксация, дегидратация, гибридизация, отмывка от красителя. Принцип действия. Примеры зондов. Иммунофлуоресцентное окрашивание прямой и непрямой метод. Объективы и иммерсионные масла для люминесцентной микроскопии. Источники освещения для люминесцентной микроскопии газово-разрядные лампы СВД-100, ДРШ-250, НВО-100, НВО-50, светодиоды, лазеры. Знакомство с принципом конструкции люминесцентных микроскопов на примере ОИ-17. Знакомство с работой люминесцентных микроскопов «Биомед 6 люм», МЛД-1. История микроскопической техники. Раскопки Трои Г. Шлиманом. Находки в Саргоне. Труды античных философов. Труды Роджера Бэкона. Ханс Янссен и его сын Захария Янссен. «Оккиолино» Галилео Галилея. Христиан Гюйгенс. «Микрография» Роберта Гука. Как Левенгук делал свои линзы. Объективы-ахроматы Леонарда Эйлера. Объективы Саллига. Применение иммерсии Джованни Батиста Амичи. Поляризационный микроскоп Г. Сорби. Открытие люминесценции Джорджом Топитом. Фирма Карла Фридриха Цейса. Дифракционная теория изображения Эрнста Аббе. Принцип Келера и люминесцентного микроскопа Августа Кёллера. Ультрамикроскоп Рихарда Адольфа Зигмонди. Гетеродинный ультрафиолетовый универсальный микроскоп Рояла Реймонда Райфа. Труды по люминесцентной микроскопии М. Хайтингера и Штруггера. Внедрение иммунофлуоресценции А.Н. Кунсом. Фазово-контрастное устройство Фрица Цернике. Создание - объектива планахромата Г. Богехольдом. Разработка принципа конфокально лазерного сканирующего люминесцентного микроскопа Марвином Ли Минским. Флуоресцентный наноскоп Андрея Климова, и Штефана Хеллу. Проточный цитометр - микроскоп. Рекомендуемая литература Зубжицкий Ю.Н. Метод люминесцентной микроскопии. М.: Медицина, 1964. Константинова - Шлезингер M. А. Люминесцентный анализ. М.: Государственное издательство физико-математической литературы, 1961. Карнаухов В.Н. Люминесцентный анализ клеток. Пущино: «Аналитическая микроскопия», 2002 Пешков М.А. Световой микроскоп и его разновидности. В кн.: Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней. Ред. Л.Т. Матвеева, М.И. Соколова. М.: Медицина, 1964. Роскин Г.И. Микроскопическая техника. М.: «Советская наука» 1946. Световая микроскопия в биологии. Методы. Ред. А.Лейси. М.: Мир, 1992.. Федин Л.А. Микроскопы, принадлежности к ним и лупы М:ОБОРОНГИЗ., 1961 Федин Л.А. Барский И.Я. Микрофотография. Л.: «Наука», 1971. Франсон М. Фазовоконтрастный и интерференционный микроскопы. М.: Мир, 1974.
- Добавил в систему: Якушев Андрей Владимирович
Преподавание курса
- 4 сентября 2017 - 29 сентября 2017 Налобин Денис Сергеевич
- МГУ имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Кафедра эмбриологии
- обязательная, по выбору (спецкурс), лекции, 22 часов
- Автор: Якушев А.В.
- 4 сентября 2017 - 29 сентября 2017 Налобин Денис Сергеевич
- МГУ имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Кафедра эмбриологии
- обязательная, по выбору (спецкурс), практические занятия, 85 часов
- Автор: Якушев А.В.
- 5 сентября 2016 - 30 сентября 2016 Налобин Денис Сергеевич
- МГУ имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Кафедра эмбриологии
- обязательная, по выбору (спецкурс), лекции, 45 часов
- Автор: Якушев А.В.
- 5 сентября 2016 - 30 сентября 2016 Налобин Денис Сергеевич
- МГУ имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Кафедра эмбриологии
- обязательная, по выбору (спецкурс), практические занятия, 171 часов
- Автор: Якушев А.В.
- с 1 сентября 2014 Супруненко Елена Александровна
- МГУ имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Кафедра эмбриологии
- обязательная, вариативной части, практические занятия, 171 часов
- Автор: Якушев А.В.
- с 1 сентября 2014 Супруненко Елена Александровна
- МГУ имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Кафедра эмбриологии
- обязательная, вариативной части, лекции, 45 часов
- Автор: Якушев А.В.
- 1 сентября 2010 - 31 декабря 2014 Якушев Андрей Владимирович
- МГУ имени М.В. Ломоносова, Факультет почвоведения, Кафедра биологии почв
- обязательная, по выбору (спецкурс), лекции, 28 часов
- Автор: Якушев А.В.
- 1 сентября 2010 - 31 декабря 2014 Якушев Андрей Владимирович
- МГУ имени М.В. Ломоносова, Факультет почвоведения, Кафедра биологии почв
- обязательная, по выбору (спецкурс), практические занятия, 24 часов
- Автор: Якушев А.В.
- 3 сентября 2001 - 30 сентября 2013 Супруненко Елена Александровна
- МГУ имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Кафедра эмбриологии
- обязательная, базовой части, лекции, 40 часов
- Автор: Якушев А.В.
- 3 сентября 2001 - 30 сентября 2013 Супруненко Елена Александровна
- МГУ имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Кафедра эмбриологии
- обязательная, базовой части, практические занятия, 104 часов
- Автор: Якушев А.В.