|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Иммуногистохимические и морфологические характеристики увеальной меланомы у пациентов различного возрастадипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Данилова Н.В.
- Автор: Давыдова Сара Юрьевна
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2015
- Аннотация: Увеальная меланома (УМ) одна из наиболее часто встречающихся внутриглазных злокачественных опухолей. Несмотря на значительный прогресс в области лучевой и химиотерапии УМ, примерно у 40-50% пациентов с большим первичным опухолевым узлом развиваются отдаленные метастазы, а смерть от опухолевой прогрессии наступает в первые годы после операции. Исходя из отсутствия лимфатического дренирования увеального тракта, УМ метастазирует только гематогенным путём преимущественно в печень (95%), легкие (24%), кости (16%) и кожу (11%). В последнее 10-летие активно обсуждается увеличение доли молодых пациентов (до 20-35 лет) с диагнозом УМ на фоне общего снижения возрастной планки при постановке диагноза (от 55-60 лет) и влияние различных морфологических факторов на прогноз в этой группе. На данный момент активно изучается экспрессия различных иммуногистохимических маркеров, таких как: Ki67, p53 и p16, TGFb и EGFR, и MMP9, – и их роль в патогенезе меланомы сосудистого тракта. Исследование проводилось на архивном материале от 46 пациентов МНИИ глазных болезней им. Г. Гельмгольца за период с января 2011 по июль 2012 года. Среди 46 наблюдений - 24 мужчины и 22 женщин, возраст которых находится в диапазоне от 15 до 74 лет (основной возраст постановки диагноза 58 лет, средний возраст 44,5 года). Всех пациентов мы разделили на три возрастные группы: молодую до 35 лет (7 пациентов), среднюю от 35 до 55 лет (14 пациентов) и пожилую от 55 лет (25 пациентов). Образцы опухоли, взятые из боковой колодки глаза после энуклеации, были зафиксированы в 10% забуференном формалине в течение 24-72 часов и залиты в парафиновые блоки. С каждого блока были изготовлены 4-μк срезы, которые монтировали на высоко адгезивные стекла.Иммуногистохимическое окрашивание и обработка материала проводилась с использованием автостейнера Dako. Депарафинирование и регидратацию проводили с помощью системы EnVisison Flex (Dako, Denmark) при температуре 95-98С и pH 9,0 в течение 20 мин в модуле предобработки к автостейнеру (PT-module). В качестве хромогена был использован DAB. Анализ результатов проводился с использованием программы Stata 12 по методу Краскела-Уоллиса, который является многомерным обобщением U-теста Манна-Уитни для ранговых данных. Для оценки уровня корреляции использовался тест Спирмена, который также является ранговым. Уровень значимости (р) принимался равным 0,05 для каждого из методов. На основании проведённого исследования выявлена корреляция между выраженной экспрессией маркера TGFb и количеством митозов в опухоли (по тесту Спирмена p=0,0055) и возрасту постановки диагноза (по тесту Спирмена p=0,1). Более того, выраженная экспрессия TGFb обратно пропорциональна уровню экспрессии p16INK4a, который также коррелировал с увеличением возраста постановки диагноза (по тесту Краскела-Уоллиса p=0,0266). Генетические исследования зарубежных авторов выявили, что для пациентов с УМ характерно наличие мутаций в хромосоме 3p22, которая кодирует в том числе ген TGFbR2, который в свою очередь ведет к изменениям в SMAD-каскаде (а именно SMAD 2, 3 и 4 типов), запускающих синтез целого семейства ингибиторов Cdk. На основании приведённых данных, мы можем предположить, что полученные нами результаты свидетельствуют в пользу того, что патогенез УМ напрямую связан с мутациями в генах кодирующих TGFb и его рецепторы, которые ведут к нарушению регуляции клеточного цикла через угнетение синтеза p16 и, как следствие, увеличению количества митозов. Примечательно, что в ходе нашего исследования установлено, что высокий уровень экспрессии p16 ассоциирован с пожилым возрастом на момент постановки диагноза. Исходя из всего выше написанного, можно сделать вывод, что в норме с возрастом количество p16 должно увеличиваться, угнетая тем самым пролиферацию меланоцитов пигментного эпителия сетчатки. Но как уже известно, с увеличением возраста пациента вероятность диагностировать УМ резко возрастает. Более того, по нашим данным не выявлено корреляции между уровнем p16 и степенью атипии в опухоли (по тесту Краскела-Уоллиса p=0,924), таким образом для подтверждения гипотезы необходимо проведение дальнейших генетических исследований мутаций в гене p16 с учетом возраста постановки диагноза. Относительно гистологических характеристик злокачественности процесса, таких как: эпителиоидный гистологический тип и прорастание всей толщи склеры и длины эмиссариев, нами выявлено наличие достоверной связи между глубиной инвазии УМ и выраженной экспрессией маркера EGFR (p=0,0007). Помимо этого, экспрессия маркеров TGFb и MMP 9 имеет тенденцию к увеличению на начальных этапах инвазии УМ в вены и оболочки глаза (p=0,0962 и p=0,098 соответственно). В то время как, экспрессия маркеров EGFR и MMP9 обратно пропорциональна количеству эпителиоидных клеток (p<0,1), что противоречит данным литературы о наличии связи между высоким уровнем MMP9 и EGFR и большей доли эпителиоидных клеток в опухоли. На данный момент MMP9 и EGFR активно исследуются онкологами. Примечательно, что экспрессия маркеров MMP9, TGFb и EGFR связана с начальным этапом инвазии опухоли в структуры глаза. Наши данные противоречат существующей в литературе гипотезе об активации MMP9 на более поздних этапах диссеминирования УМ. Маркеры р53, р16, Ki 67 не продемонстрировали статистически значимой связи с гистологическими характеристиками УМ. На основании наших результатов можно предположить, что возможное использование таргетных препаратов на пациентах с диагнозом УМ рациональнее всего проводить на более доброкачественных формах и начальных этапах инвазии, как возможный способ избежать энуклеации поражённого глаза.
- Добавил в систему: Данилова Наталья Владимировна