|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Повышение термостабильности рекомбинантной формиатдегидрогеназы из сои Glycine max методом направленного мутагенезадипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Тишков В.И., Алексеева А.А.
- Автор: Серенко Алексей Александрович
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2011
- Аннотация: 1. Проведен анализ первичной и четвертичной структуры ФДГ из сои, выбраны аминокислотные остатки для проведения направленного мутагенеза: Leu24Asp, Val127Arg, Val281Ile, Ala275Met, Phe244Ser, Phe244Thr 2. С помощью полимеразной цепной реакции проведен направленный мутагенез. Получены плазмиды только необходимыми мутациями, что подтверждено результатами секвенирования. Осуществлена экспрессия мутантных белков в клетках E.coli. Проведена очистка по методике, разработанной для SoyFDH дикого типа. Получены препараты мутантных ферментов, чистота которых составляет не менее 95%. 3. Исследована термостабильность мутантных форм SoyFDH при нескольких температурах в сравнении с ферментом дикого типа. Показано, что для мутантных ферментов процесс термоинактивации является необратимым и протекает по мономолекулярному механизму, так же, как и для белка дикого типа. 4. Замены Leu24Asp, Val127Arg привели к понижению термостабильности, замена Val281Ile не повлияла не термостабильность. При введении замен М1, М3 и М4 происходит значительное повышение устойчивости к тепловой денатурации. 5. Мутантная форма SoyFDH_М4 по термостабильности не уступает большинству формиатдегидрогеназ из других источников 6. Изучено влияние аминокислотных замен на каталитические свойства фермента. Введенные аминокислотные замены в пределах ошибки эксперимента не влияют на константу Михаэлиса по NAD+. При введении замен М1, М3 и М4 наблюдается увеличение каталитической константы.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович