|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Формиатдегидрогеназа из бактерий Staphylococcus aureus. Клонирование, экспрессия в клетках E.coli и свойства рекомбинантного фермента.дипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Тишков В.И.
- Автор: Войнова Наталья Сергеевна
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2008
- Аннотация: 1. Клонированы полноразмерный (saufdh1) и укороченный (saufdh2) гены формиатдегидрогеназы из бактерий Staphylococcus aureus (SauФДГ1 и SauФДГ2, соответственно) и осуществлена их экспрессия в клетках E.coli в виде активных растворимых ферментов. 2. Проведено сравнительное исследование кинетических свойств и термостабильности полноразмерной и укороченной формы SauФДГ. Полученные данные свидетельствуют, что in vivo наиболее вероятно синтезируется полноразмерная форма фермента SauФДГ1. 3. Проведено препаративное культивирование SauФДГ1. Выход активного фермента составил 1500 Ед с литра среды или 40-50% от общего растворимого белка E.coli. Разработана методика очистки фермента. Получен высокоочищенный препарат рекомбинантной ФДГ из S.aureus и изучены его кинетические свойства. Исследованы зависимости скорости реакции от концентрации субстратов, получены зависимости максимальной скорости ферментативной реакции от температуры, а также изучено ингибирование SauФДГ1 аналогами субстрата и продукта. Показано, что ферментативная реакция протекает с образованием тройного фермент-субстратного комплекса, причем SauФДГ имеет наиболее высокие значения КМ по формиату и NAD+ среди всех формиатдегидрогеназ. Слабая зависимость скорости реакции от температуры позволяет сохранять достаточно высокую активность фермента в широком диапазоне температур.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович