|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Влияние холестерина на жизнеспособность гамет при криоконсервациидипломная работа (Бакалавр)
- Научный руководитель: Симоненко Е.Ю.
- Автор: Смоленцева Д.А.
- Тип: Бакалавр
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2019
- Аннотация: В настоящее время криоконсервация является надежным способом сохранения биологических объектов таких, как кровь, стволовые клетки, ткани, а криохранение сперматозоидов, яйцеклеток, эмбрионов является неотъемлемой частью вспомогательных репродукционных технологий. Однако криоконсервация также приводит и к нежелательным явлениям, вызванным повреждением биологического материала. Одним из наиболее подверженных повреждениям при криоконсервации компонентов клетки является плазматическая мембрана; однако, существующие комплексные крипротектанты чаще всего не содержат веществ, направленных на стабилизацию именно этой клеточной структуры. Одним из наиболее эффективных методов, описанных в литературе, является модификация криопротектантов суспензией яичного желтка. Однако для криоконсервации гамет человека применение сред, имеющих животное происхождение, нежелательно. Поэтому целью работы Смоленцевой Д.А. явилась разработка модификации существующего комплексного криопротектанта компонентом яичного желтка холестерином и определить влияние холестерина на выживаемость сперматозоидов после криоконсервации. В результате сбора обширных литературных данных и проведенных экспериментальных исследований Смоленцевой Д.А. были изучены различные способы «доставки» холестерина в мемрану сперматозоидов. Ею был разработаны детальные протоколы формирвоания комплексов циклодекстрин-холестерин (ЦД-Х), формирования липосом; проведены тесты на цитотоксичность для всех исследуемых компонент криопротектора, а также проанализировано изменение концентрации холестерина в мембране сперматозодов после их инкубации с ЦД-Х. Во время проведения исследования Смоленцева Д.А. освоила методы работы с культурами клеток, методы заморозки, метод ЭПР, а также тест Либермана-Бурхарда. В результате работы Смоленцевой Д.А. показано, что модификация криопротектора комплексами циклодекстрин-холестерин эффективнее, чем липосомами или раствором холестерин-н-октан, и увеличивает долю жизнеспособных клеток на 14%. Также определена концентрация холестерина в мембране сперматозоида человека, что составляет 30,5 3 нмоль/(20млн клеток). Эти значения совпадают с литературными данными. Для клеток, инкубировавшихся с ЦД-Х, концентрация холестерина составила 953 нмоль/(20млн клеток).
- Добавил в систему: Симоненко Екатерина Юрьевна