|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Роль клеточного белка SFPQ в регуляции репликации вируса иммунодефицита человекадипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Агапкина Ю.Ю., Шадрина О.А.
- Автор: Кихай Т.Ф.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2020
- Аннотация: Актуальность. В настоящее время существуют препараты, способные замедлять течение ВИЧ-инфекции, тем не менее, заболевание активно распространяется и остается неизлечимым. Существующие препараты направлены на ингибирование вирусных ферментов, и основной проблемой такой терапии является развитие вирусной резистентности. Перспективным направлением для антивирусной терапии является создание препаратов, ингибирующих взаимодействие белков ВИЧ с клеточными белками-партнерами, поэтому поиск и изучение клеточных белков, участвующих в репликации ВИЧ, является актуальной задачей. Одним из клеточных белков-партнеров ВИЧ является белок SFPQ (Splicing factor, proline- and glutamine-rich), который участвует во многих клеточных процессах, таких как транскрипция, сплайсинг и транспорт мРНК. SFPQ может существовать как в виде гомодимера, так и образовывать гетеродимер с белком NONO (Non-POU domain-containing octamer-binding protein), который является его клеточным партнером. О роли клеточного белка SFPQ в репликации ВИЧ известно очень мало, предполагается только его участие в обратной транскрипции. Помимо этого SFPQ был обнаружен в прединтеграционных комплексах, включающих обратную транскриптазу и интегразу. Кроме того, показано, что рекомбинантные интеграза ВИЧ-1 и SFPQ могут взаимодействовать друг с другом, при этом влияние на стадию интеграции не исследовано. В связи с этим целью данной работы стало изучение влияния белка SFPQ на ранние стадии репликации ВИЧ-1 и характеристика взаимодействия данного белка с вирусными ферментами интегразой и обратной транскриптазой. Основные результаты. В ходе работы было изучено влияние белка SFPQ на ранние стадии репликации ВИЧ с использованием VSV-G-псевдотипированного репликативно-некомпетентного вектора, которым заражали клетки с повышенным за счет суперэкспрессии уровнем SFPQ. Далее с помощью количественной ПЦР детектировали различные формы вирусной ДНК в клетке: обратно-транскрибированной, интегрированной, и репарированной форм, - что позволяет сделать вывод об эффективности протекания обратной транскрипции, интеграции и пост-интеграционной репарации. Было показано, что SFPQ не влияет на стадию обратной транскрипции, но влияет на интеграцию и постинтеграционную репарацию. В ходе работы были получены векторы для прокариотической экспрессии белков SFPQ и NONO, выделены и очищены препараты рекомбинантных белков. Показано, что рекомбинантные белки SFPQ и NONO образуют гетеродимер SFPQ/NONO, что свидетельствует об их функциональности. Изучено взаимодействие рекомбинантных белков SFPQ и NONO, а также гетеродимера SFPQ/NONO с вирусными ферментами и установлено, что SFPQ и гетеродимер SFPQ/NONO не связывают обратную транскриптазу, но образуют комплексы с интегразой ВИЧ-1, при этом NONO с интегразой не взаимодействует. Впервые установлено, что рекомбинантный белок SFPQ, а также гетеродимер SFPQ/NONO взаимодействуют с клеточным белком Ku70, участвующим в пост-интеграционной репарации ВИЧ-1. Мы предполагаем, что влияние SFPQ на постинтеграционную репарацию может быть ассоциировано с его взаимодействием с важным для репарации белком Кu70.
- Добавил в систему: Агапкина Юлия Юрьевна