|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Влияние остатка Phe290 на каталитические свойства и термостабильность формиатдегидрогеназы из сои Glycine maxдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Тишков В.И., Алексеева А.А.
- Автор: Каргов Иван Сергеевич
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2013
- Аннотация: Данная дипломная работа является частью систематических исследований формиатдегидрогеназы из сои Glycine max, проводимых в нашей лаборатории. Этот фермент обладает самыми низкими значениями Km как по NAD+, так и по формиату, однако его недостатками являются низкая каталитическая константа и низкая термостабильность по сравнению с бактериальными и дрожжевыми ферментами. Ранее в нашей лаборатории были получены три мутанта этого фермента с заменами в положении Phe290 с повышенной термостабильностью, однако с худшими по сравнению с диким типом кинетическими свойствами. Целью данной дипломной работы было продолжение изучения роли этого аминокислотного остатка в свойствах формиатдегидрогеназы из сои Glycine max методом направленного мутагенеза. В процессе данной работы был проведен подробный анализ структуры ФДГ из сои, получены 5 новых мутантов, проведена их экспрессия в клетках E.coli. Ферменты были выделены впрактически в гомогенном виде, изучены их кинетические свойства и термостабильность. Для всех полученных мутантов наблюдали увеличение каталитической константы, а константы Михаэлиса по обоим субстратам или не менялись, или улучшались. Все пять полученных мутантов были более стабильны, чем фермент дикого типа, а в случае замены Phe290Glu эффект стабилизации составлял 300 раз. Таким образом, в результате выполнения данной работы были получены мутанты формиатдегидрогеназы сои как с повышенной термостабильностью, так и с улучшенными каталитическими параметрами.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович