|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Белковая инженерия структуры активного центра формиатдегидрогеназы из бактерий Staphylococcus aureusдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Юрченко Т.С., Тишков В.И., Пометун А.А.
- Автор: Болотова Сэсэг Баторовна
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2021
- Аннотация: В данной работе объектом изучения является рекомбинантная формиатдегидрогеназа из патогенных бактерий Staphylococcus aureus (SauФДГ). SauФДГ обладает высокой температурной стабильностью и самой большой каталитической константой по сравнению с описанными ранее ФДГ; при этом недостатками SauФДГ являются высокие значения констант Михаэлиса по NAD+ и формиату. С целью улучшения кинетических параметров фермента методом сайт-направленного мутагенеза были получены и охарактеризованы 4 мутантные формы SauФДГ c заменами: I193T, I193T F194V, V119A, V119G. Для мутантных форм SauФДГ c заменами I193T F194V, V119A, V119G было показано снижение констант Михаэлиса и увеличение каталитической эффективности по NAD+ минимум в 2 раза по сравнению с ферментом дикого типа; для всех мутантов увеличилась каталитическая эффективность по формиату, наибольшее влияние имели замены в 119 положении. Показано, что стабильность мутантных форм при повышенной температуре ниже, чем для wt-SauФДГ; для SauФДГ c заменами I193T, I193T F194V и V119A возрастает как энтальпия, так и энтропия процесса термоинактивации. Также было обнаружено, что использование комплексной буферной системы 0,1M Cit-NaPB-Tris-Gly для мутантных форм SauФДГ I193T F194V и V119A увеличивает каталитическую эффективность, а также термостабильность минимум в 2 раза.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович