Аннотация:Цель работы -- исследование изменения некоторых ключевых клеточных окислительно-восстановительных параметров с помощью генетически кодируемых биосенсоров в модели воспаления и гипоксии-реоксигенации.
Задачи:
● Тестирование нового сенсора Hypocrates в условиях эндогенного гипогалогенного стресса на модели фагоцитоза.
● Подготовка генетических конструкций для получения трансгенных рыб D. rerio, экспрессирующих сенсор Hypocrates2 в нейтрофилах.
● Отработка методики прижизненной микроскопии мальков D. rerio, экспрессирующих генетически кодируемые биосенсоры, в проточной гипоксической установке.
● Регистрация динамики редокс-статуса пула НАД, внутриклеточного рН и концентрации Н2О2 в кардиомиоцитах мальков D. rerio in vivo в модели гипоксии-реоксигенации.
Результаты:
Протестирован новый сенсор Hypocrates в условиях эндогенного гипогалогенного стресса на модели фагоцитоза. Продемонстрированы эффекты защелачивания фагосомы и образование гипохлорит аниона в ходе миелопероксидазной реакции.
● Подготовлены генетические конструкции на основе системы Tol2 транспозона для получения трансгенной линии D. rerio с экспрессией Hypocrates2 в нейтрофилах.
● Начат процесс получения поколений F0 трансгенных линий D. rerio на основе полученных конструкций.
● Зафиксировано накопление НАДН в условиях гипоксии в сердечной ткани D. rerio и последующее окисление пула НАД до исходного состояния в процессе реоксигенации.
● Зафиксировано уменьшение цитоплазматического рН кардиомиоцитов D. rerio в пределах 0,2-0,3 единиц во время гипоксии и восстановление до базового уровня на стадии реоксигенации.
● Зафиксировано снижение базового уровня Н2О2 на 10% в цитозоле кардиомиоцитов D. rerio во время гипоксии и последующий рост на 10% в период реоксигенации.