Влияние аминокислотных замен, имитирующих фосфорилирование, на функциональную активность факторов инициации трансляции eIF4B и eIF5дипломная работа (Специалист)
Аннотация:Инициация трансляции у эукариот – это сложный многостадийный процесс, в котором принимают участие более десятка специализированных белков, называемых факторами инициации (eIF). Многие из этих факторов подвержены пост-трансляционным модификациям, в первую очередь фосфорилировнию. В некоторых случаях показано, что фосфорилирование приводит к увеличению или уменьшению активности соответствующих факторов, однако в большинстве случаев роль этих модификаций в инициации трансляции изучена крайне плохо. В частности, было обнаружено, что факторы инициации eIF4B и eIF5 являются фосфобелками. Были идентифицированы сайты фосфорилирования, а также клеточные киназы, ответственные за модификацию этих факторов. По предварительным данным, фосфорилирование может оказывать существенное влияние на активность eIF4B in vivo и eIF5 in vitro и in vivo. Тем не менее, эти данные носят косвенный, а порой и противоречивый характер. Напрямую же функциональное значение фосфорилирования ни для eIF4B, ни для eIF5 до сих пор показано не было.
Целью работы было изучить влияние аминокислотных замен в белках eIF4B и eIF5, имитирующих фосфорилирование по основным сайтам, на их функциональную активность в системе сборки инициаторных комплексов из очищенных компонентов, а также в трансляционной системе in vitro.
В работе сделаны следующие выводы:
1. Имитирующие фосфорилирование аминокислотные замены S422E и S422D в факторе инициации трансляции eIF4B не приводят к изменению его функциональной активности in vitro в системе реконструкции 48S комплексов из очищенных компонентов и в бесклеточной системе трансляции.
2. Имитирующая фосфорилирование аминокислотная замена SS389-390EE в факторе инициации eIF5 незначительно уменьшает его функциональную активность в системе реконструкции 80S комплексов из очищенных компонентов и вызывает соответствующее уменьшение эффекта этого фактора на трансляцию мРНК с uAUG-кодонами.