Аннотация:Из экстракта клеток-продуцентов выделена рекомбинантная глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа человека (hGAPD) без дополнительных мотивов с кинетическими параметрами близкими к параметрам нативных белков млекопитающих и с удельной активностью 115±7 мкмоль NADH/мин*мг.
Методом кислотного осаждения из экстракта клеток-продуцентов выделен рекомбинантный α-синуклеин человека без дополнительных мотивов.
Показано, что взаимодействие hGAPD с α-синуклеином приводит к инактивации hGAPD, причем степень инактивации hGAPD возрастает при повышении концентрации α-синуклеина.
Методами иммунопреципитации и твердофазного иммуноферментного анализа было подтверждено связывание α-синуклеина с hGAPD.
Взаимодействие hGAPD и α-синуклеина, а также инактивация фермента, наблюдается в растворах при физиологических значениях ионной силы. При этом добавление кофактора фермента - NAD+ - снижает степень ингибирования фермента α-синуклеином, а частичное окисление SH-групп активного центра hGAPD стимулирует инактивацию.
Методом динамического лазерного светорассеяния показано, что при взаимодействии hGAPD и α-синуклеина при 22 °С не происходит ни агрегации, ни диссоциации фермента на димеры. При этом связывание hGAPD с α-синуклеином снижает температуру начала тепловой агрегации фермента примерно на 4°С .