|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Бензо[a]пирен-содержащие ДНК как инструмент исследования комплексов ДНК-метилтрансферазы Dnmt3a с ДНКдипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Громова Е.С.
- Автор: Минеро Габриэль Хосе Антонио Сальвадор
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2010
- Аннотация: Целью настоящей работы стало исследование взаимодействий каталитического домена МТазы мыши Dnmt3a (Dnmt3a-CD) с B[a]P-ДНК методом флуоресценции. В рамках работы сконструированы 30-ти звенные ДНК-дуплексы, содержащие аддукты аденина и гуанина с бензо[a]пиреном. Выделены Dnmt3a-CD и белок-активатор Dnmt3L. Присутствие остатка B[a]P в ДНК не приводило к ухудшению связывания Dnmt3a-CD с поврежденной ДНК. Флуоресцентные свойства B[a]P-ДНК зависели от их структуры и природы поврежденного основания. Обнаружена зависимость флуоресцентных свойств комплексов B[a]P-ДНК с Dnmt3a-CD в отсутствие и в присутствии Dnmt3L от положения B[a]P в субстрате и конфигурации B[a]P-dG и B[a]P-dА. В комплексах Dnmt3a-CD с B[a]P-ДНК флуоресценция остатка B[a]P разгоралась при его локализации в малой бороздке двойной спирали и при его интеркалировании в двойную спираль рядом с CpG-участком без смещения оснований. Флуоресцентные свойства комплексов Dnmt3a-CD с B[a]P-ДНК практически не менялись при интеркалировании флуорофора в ДНК с нарушением пар оснований. В присутствии белка-активатора Dnmt3L разгорание флуоресценции в комплексе Dnmt3a-CD с B[a]P-ДНК, содержащей (+)-транс-B[a]P-dG аддукт в CpG-участке, увеличивалось в 4-5 раз. Сделано предположение, что наблюдаемые эффекты обусловлены выпетливанием остатка цитозина-мишени и движением каталитической петли Dnmt3a-CD в сторону малой бороздки ДНК при образовании фермент-субстратного комплекса, а белок-активатор Dnmt3L способствует правильному позиционированию аминокислотных остатков в активном центре Dnmt3a-CD относительно CpG-участка в ДНК. Предполагается, что конформации каталитической петли в комплексах эукариотической МТазы Dnmt3a-CD с ДНК и прокариотических МТаз SssI и HhaI с ДНК различны.
- Добавил в систему: Громова Елизавета Сергеевна