Изучение роли специфических аминокислотных остатков подсемейств гидролаз с N-концевым нуклеофилом в механизме действия пенициллинацилазы E.coli методами генетической инженериидипломная работа (Специалист)
Аннотация:Ферменты все чаще находят применение в промышленных процессах и тонком органическом синтезе. Преимуществами ферментативного катализа является высокая специфичность и стереоспецифичность, а так же возможность проводить сложные химические превращения в мягких условиях в водной среде. Одним из наиболее широко применяемых биокатализаторов является пенициллинаилаза E.coli, принадлежащая к недавно открытому суперсемейству гидролаз с N-концевым нуклеофилом. Благодаря хорошо развитым методам генетической инженерии становится возможным изменять свойства биокатализатора для решения конкретных промышленных задач. Однако до настоящего времени не существует универсальных подходов для выбора мутаций с целью создания биокатализаторов заданными свойствами.
В последнее время наблюдается быстрый рост числа расшифрованных геномов организмов, и как следствие этого, аминокислотных последовательностей гомологичных белков. Это открывает новые перспективы для биоинформатических методов анализа семейств ферментов. Общеизвестно, что консервативные остатки являются важными для поддержания структуры или осуществления катализа. При этом очевидно, что для объяснения функциональных различий в семействе ферментов использовать консервативные остатки невозможно.Следующим шагом в изучении множественных выравниваний ферментов является определение специфических позиций подсемейств. Специфические позиции консервативны внутри подсемейства, но различны между ними. Предполагается, что эволюция функциональных свойств в семействе ферментов происходила путем мутаций именно этих аминокислотных остатков, поэтому специфические позиции представляют наибольший интерес при получении мутантных ферментов с заданными свойствами.
Поэтому целью данной работы явилось экспериментальное изучение роли специфических остатков подсемейств Ntn-гидролаз на примере пенициллинацилазы E.coli.