Выявление и функциональный анализ регуляторных генов, контролирующих гомеостаз ионов железа у цианобактерии Synechocystis sp. PCC 6803дипломная работа (Специалист)
Аннотация:Цель работы заключалась в выявлении и функциональном анализе регуляторных генов, контролирующих гомеостаз железа у цианобактерии Synechocystis 6803. В связи с этим были поставлены следующие задачи:
1. Отработать методику культивирования, обеспечивающую формирование дефицита железа в клетках цианобактерий.
2. Провести сравнительный анализ адаптивного ответа клеток трех различных
штаммов ДТ на недостаток железа в среде.
3. Выяснить роль гена pfsR в регуляции гомеостаза железа.
4. Исследовать участие генов pcrR и pchR2 в регуляции экспрессии кластера генов,
кодирующих компоненты предполагаемых систем транспорта железа у Synechocystis 6803.
Выводы из работы:
1. Выявлены различия у трех штаммов дикого типа цианобактерии Synechocystis sp. PCC 6803 (ДТ-М, ДТ-R и ДТ-J) в адаптивном ответе на дефицит железа: во времени наступления хлороза и уровне индукции гена futC, кодирующего компонент основной АВС-системы транспорта ионов железа в клетку.
2. Показано, что ген pfsR, кодирующий репрессор транскрипции семейства TetR, негативно контролирует экспрессию входящих с ним в один кластер генов slr1501 и slr1113 с неизвестной функцией. При этом он не принимает участия в регуляции генов bfrA и bfrB, кодирующих бактериоферритины, что противоречит опубликованным данным (Jantaro et al., 2006). Таким образом, ген pfsR не вовлечен в контроль гомеостаза железа.
3. Структурно-функциональный анализ кластера, содержащего 13 структурных генов предполагаемых систем транспорта железа (fecC, fecD, fecE, fecB1, fecB2, fecB3, fecB4, iutA, fhuA1, exbB, exbD, fhuA2, fhuA3), 3 регуляторных гена, кодирующих транскрипционные факторы AraC семейства (pcrR, pchR1, pchR2), а также гены с неизвестной функцией (sll1203, sll1204, sll1407) выявил 2 оперона: fecE-fecB1 и exbB-exbD-fhuA2.
4. Установлено, что экспрессия трех регуляторных генов (pcrR, pchR1, pchR2), трех структурных генов (fhuA1, fhuA3, sll1407) и оперонов fecE-fecB1 и exbB-exbD-fhuA2 индуцируется дефицитом железа. Экспрессия трех генов fecC, fecD и iutA не зависит от наличия ионов железа в среде.