|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Ген prqA цианобактерии Synechocystis sp. PCC 6803 в качестве потенциального трансгена для конструирования растений с повышенной устойчивостью к стрессовым факторамдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Бабыкин М.М., Голденкова-Павлова И.В.
- Автор: Голенкина С.А.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2009
- Аннотация: Целью работы являлся функциональный анализ гена prqA в качестве потенциального трансгена для получения модельных растений табака с повышенной устойчивостью к метилвиологену (MV) и другим стрессовым факторам. В связи с этим были поставлены следующие задачи: 1. Получить экспериментальное доказательство экспортерной активности белка PrqA в отношении MV. 2. Сконструировать трансляционные слияния гена prqA с геном-репортером licBM2 и показать их экспрессию в клетках Escherichia coli. 3. Доказать сохранение исходной функции гена prqA в составе слияний с геном-репортером licBM2 в клетках цианобактерий. 4. Провести экспресс-анализ функциональной активности слияний гена prqA с геном-репортером licBM2 в клетках растений табака. Выводы из результатов работы: 1. С использованием 14С-меченого метилвиологена экспериментально доказано, что белок PrqA, относящийся к семейству МАТЕ белков множественной устойчивости к антибиотикам и другим токсичным соединениям, функционирует в качестве Na+-зависимого экспортера метилвиологена в клетках цианобактерий. 2. Сконструированы трансляционные слияния гена prqA с геном-репортером licBM2, кодирующим термостабильную лихеназу. Установлено, что экспрессия этих слияний в клетках E. coli приводит к образованию гибридных белков PrqA-LicBM2 и LicBM2-PrqA, проявляющих активность лихеназы. 3. Введение слияния генов prqA-licBM2 в клетки цианобактерии детерминирует повышение их устойчивости к метилвиологену, что свидетельствует о сохранении функции гена prqA в С-терминальном слиянии с геном-репортером. 4. В случае N-терминального слияния гена prqA с геном-репортером (licBM2-prqA) повышенная экспрессия слитых генов сенсибилизирует клетки к воздействию метилвиологена. Это согласуется с предсказываемым изменением вторичной структуры пептида PrqA в гибридном белке, которое может критически влиять на функцию цитоплазматической мембраны клетки. 5. Установлено, что слияние генов prqA-licBM2 проявляет свою активность на уровне транскрипции и на уровне функционирования репортерного белка в условиях временной экспрессии в клетках растения табака Nicotiana benthamiana. Таким образом, полученные данные указывают на возможность эффективного применения слияния prqA-licBM2 для трансгенеза модельных растений.
- Добавил в систему: Бабыкин Михаил Михайлович