|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Идентификация генов, мутации которых восстанавливают устойчивость к метилвиологену у мутантов manR и pepP Synechocystis sp. PCC 6803дипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Бабыкин М.М.
- Автор: Шаронова Е.И.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2006
- Аннотация: В задачи работы входило: 1. Получение на основе мутантов manR и pepP, чувствительных к окислительному стрессу, коллекции псевдоревертантов с восстановленной устойчивостью к метилвиологену. 2. Физиолого-биохимическая характеристика полученных псевдоревертантов с целью их классификации и разделения на основные фенотипические группы. 3. Локализация супрессорных мутаций в геноме и идентификация несущих их генов у типичных псевдоревертантов на основе мутантов manR и pepP. В результате проведенного исследования впервые показано, что повышение устойчивости клеток к метилвиологену может быть обусловлено миссенс-мутацией в гене dnaB, кодирующем репликативную ДНК-хеликазу. Обсуждаются предполагаемые молекулярные механизмы участия гена dnaB в контроле резистентности цианобактерий к данному индуктору окислительного стресса. ВЫВОДЫ. 1. На основе чувствительных к окислительному стрессу мутантов Synechocystis manR и pepP с инсерционной инактивацией генов, кодирующих транскрипционный регулятор системы транспорта марганца и металлоаминопептидазу, получена коллекция псеворевертантов с восстановленной устойчивостью к индуктору окислительного стресса метилвиологену. Детальному физиолого-биохимическому анализу подвергнуты псевдоревертанты manR/r2, manR/r5 и pepP/r7 в качестве типичных представителей фенотипически различающихся подгрупп. 2. Показано, что псевдоревертанты manR/r2 и manR/r5 перекрестно устойчивы к менадиону, тогда как псевдоревертант pepP/r7 сохраняет чувствительность исходного мутанта к данному индуктору окислительного стресса. Полученные результаты свидетельствуют о различной молекулярной природе супрессорных мутаций у исследуемых псевдоревертантов на основе мутантов manR и pepP. 3. Супрессорная мутация штамма pepP/r7 локализована в ранее изученном гене prqR, который негативно регулирует ген prqA, кодирующий потенциальный Na+/метилвиологен-антипортер. Следовательно, инактивация металлоаминопептидазы P в системе защиты от окислительного стресса, индуцируемого метилвиологеном, компенсируется у псевдоревертанта pepP/r7 активным удалением индуктора окислительного стресса из клеток. 4. Супрессорная мутация псевдоревертанта manR/r2 локализована в гене dnaB, кодирующем репликативную ДНК-хеликазу. Установлено, что эта мутация является транзицией T914C, приводящей к замене аминокислотного остатка Leu305 на Pro305 в С-концевой части белка DnaB. Таким образом, впервые показана возможность участия гена dnaB, необходимого для репликации хромосомной ДНК, в контроле устойчивости клеток к метилвиологену.
- Добавил в систему: Бабыкин Михаил Михайлович