|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Поиск генов, вовлеченных в подавление дыхания при активации гликолиза у дрожжей дипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Соколов С.С., Северин Ф.Ф.
- Автор: Балакирева Анастасия Васильевна
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2015
- Аннотация: Дрожжи Saccharomyces cerevisiae являются факультативными анаэробами и способны изменять свой метаболизм в зависимости от условий среды: в анаэробных условиях основным источником энергии является гликолиз - универсальный, хотя и не единственный, путь катаболизма глюкозы; в аэробных – окислительное фосфорилирование, осуществляемое ферментами электрон-транспортной цепи на внутренней мембране митохондрий. Однако известно, что в присутствии глюкозы в среде Saccharomyces cerevisiae способны утилизировать ее в процессе брожения и расти за счет гликолиза несмотря на аэробные условия. Этот феномен известен как «эффект Крэбтри» и описывается как «аэробный гликолиз». Но на данный момент механизм данного эффекта не известен. Было показано, что «эффект Крэбтри» характерен не только для дрожжей рода Saccharomyces, но и для просто пролиферирующих клеток, чаще всего, раковых. Поэтому распознавание механизмов этого феномена, возможно, внесет свой вклад в изучение метаболизма опухолевых клеток и поможет в борьбе против рака. Наша рабочая гипотеза, заключающаяся в том, что на внутренней мембране митохондрий находится белок, способный в присутствии высокой концентрации фруктозо-1,6-бисфосфата (или другого маркера активности гликолиза) тормозить дыхательную цепь или снижать уровень сопряжения митохондрий. Для поиска гена, кодирующего предполагаемый белок, вовлеченный в подавление дыхания при активации гликолиза у дрожжей, мы решили провести генетический скрининг. Для этого мы получили мутантный штамм Saccharomyces cerevisiae Δgpm1, в котором отсутствует фермент гликолиза фосфоглицератмутаза. Вследствие этого гликолитическая цепь в клетках Δgpm1 разорвана (рис.1), и они не в состоянии расти на среде с глюкозой, однако способны расти на среде, содержащей смесь глицерина и этанола, которые входят в гликолиз выше и ниже фосфоглицератмутазы. Добавление к смеси этанола и глицерина глюкозы или галактозы, обратно ингибирует рост Δgpm1. Поскольку ингибирующий эффект глюкозы, кроме «эффекта Крэбтри», может быть вызван глюкозной репрессией, в качестве активатора «эффекта Крэбтри» мы выбрали галактозу. Таким образом, задачей данной работы стало определить, делеция каких генов способна восстановить рост штамма Δgpm1 на среде, содержащей смесь глицерина и этанола в присутствии галактозы.
- Добавил в систему: Соколов Святослав Сергеевич