|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Определение уровня биосинтеза микотоксинов (патулин, афлатоксины B1, G1, G2) в ферментных препаратах рекомбинантных штаммов Penicillium canescensкурсовая работа (Специалист)
- Научные руководители: Чернобровкина А.В., Зоров И.Н.
- Автор: Конюков Павел Геннадьевич
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Кафедра: Кафедра аналитической химии
- Год защиты: 2021
- Курс: 2
- Аннотация: Человек давно использует ферменты мицелиальных грибов для обработки различного сырья. Однако, на протяжении долгого времени это использование ограничивалось небольшим количеством технологических процессов, таких как производство соевого соуса или сыра. В последние десятилетие, в связи с интенсификацией технологического процессов и с развитием новых технологий переработки растительного сырья и охраной окружающей среды, появилась потребность в получение ферментных препаратов с заданными свойствами. В связи с этим повысился интерес к молекулярной биологии грибов, как природных продуцентов гликолитических ферментов. Следует отметить, что изучение синтеза внеклеточных ферментов минелиальными грибами объясняется не только растущей потребностью современной промышленности в этих ферментах, но тем, что это удобная модель для изучения регуляции транскрипции эукариотических генов и секреций белков. Являясь одними из простейших эукариотических организмов, мицелиальные грибы представляют собой удобный объект для изучения. Многие их виды быстро растут, не требуют сложных питательных сред, и для них разработаны относительно простые способы генетической трансформации. В настоящее время в пищевой и фармацевтической промышленности приобретает особое значение разработка экспресс-методов определения содержания МТ (Микотоксины – это вторичные метаболиты микроскопических плесневых грибов, обладающие выраженными токсическими свойствами), обладающих мутагенными, тератогенными и канцерогенными свойствами. Создание методов их аналитического контроля продолжает оставаться в центре внимания крупнейших международных организаций (IUPAC, AOAC International и IFJU), специализированных национальных организаций стран ЕС и США, а также академий и министерств многих стран мира. В нашей стране исследования МТ, согласно плану мониторинга и Рекомендации Комиссии ЕС, ограничиваются определением содержания шести тестированных МТ – суммы афлатоксинов (АФЛ), охратоксинов (ОТ), зеараленона (ЗЕА), трихотеценов (ТТ), патулина (П), Т-2 токсина в сельскохозяйственном пищевом сырье, пищевых продуктах и кормах. МТ являются природными загрязнителями не только зерна, злаковых, бобовых, семян подсолнечника, а также овощей и фруктов, но и лекарственного растительного сырья (ЛРС), а также фармацевтических субстанций растительного происхождения, в частности, таких как жирные растительные масла, широко применяемые в фармации в качестве самостоятельных лекарственных средств, а также вспомогательных компонентов для производства лекарственных препаратов, БАД, растворителей инъекционных препаратов и др. В РФ содержание МТ в ЛРС пока не нормируется. Предотвратить загрязнение ЛРС МТ практически невозможно, поэтому необходим строгий контроль данных веществ. Однако, данная проблема и необходимость введения подобного исследования в перечень показателей оценки доброкачественности ЛРС требует углубленного изучения и оценки степени его зараженности. Кроме того, стандартные методы определения нормируемых МТ, обычно, не рассчитаны на выявление трансформированных форм, и их содержание остается неучтенным. Поэтому модифицированные лекарственным растением метаболиты МТ, получили название замаскированных (конъюгированных, трансформированных) растением МТ, содержание которых также необходимо оценивать. МТ могут образовываться также при хранении ЛРС под действием развивающихся в них микроскопических грибов. Так как основой для получения лекарственных средств растительного происхождения являются лекарственные растения, которые относятся к сырью, наиболее контаминированному различными микроорганизмами, вирусами, плесневыми грибами, то при этом заражению может подвергаться не только ЛРС, но и почти все субстанции, и лекарственные растительные препараты (ЛРП). Показано, что МТ сохраняются в высушенном ЛРС более 100 лет. Установлено, что многое ЛРС густо обсеменено плесневыми грибами класса Deuteromycetes, что можно обнаружить при проведении микроскопического анализа. Целью данной работы: исследование ферментного препарата, полученного на основе штамма-продуцента Penicillium canescens на наличие микотоксинов и, при наличии, их количественное определение, а также проверка метода концентрирования и очищения ферментного препарата от микотоксинов с использованием ультрафильтрации. В результате работы были отработаны и модифицированы методики пробоподготовки и анализа ряда микотоксинов, в том числе патулина и афлатоксинов Также была проведена градуировка хроматографа по стандартным растворам МТ, были получены моменты времени выхода МТ при модифицированных условиях. Более того, была проверена необходимость концентрирования в определении микотоксинов. Выяснилось, что при концентрировании пробы действительно увеличивается шанс детектировать присутствии и определить содержание МТ. В результате, было определено, что в ферментном препарате инулиназы содержатся следующие МТ: Афлатоксин G1 - 1,8 ±0,15*〖10〗^(-5) мг/г ферментного препарата Афлатоксин B1 - 6,2±0,3*〖10〗^(-6) мг/г ферментного препарата Патулин - 1,80±0,08*〖10〗^(-8) мг/г ферментного препарата В ходе работы также была доказана и проверена эффективность метода ультрафильтрации для избавления от присутствия МТ. В результате работы были отработаны и модифицированы методики пробоподготовки и анализа ряда микотоксинов, в том числе патулина и афлатоксинов Также была проведена градуировка хроматографа по стандартным растворам МТ, были получены моменты времени выхода МТ при модифицированных условиях. Более того, была проверена необходимость концентрирования в определении микотоксинов. Выяснилось, что при концентрировании пробы действительно увеличивается шанс детектировать присутствии и определить содержание МТ. В результате, было определено, что в ферментном препарате инулиназы содержатся следующие МТ: Афлатоксин G1 - 1,8 ±0,15*〖10〗^(-5) мг/г ферментного препарата Афлатоксин B1 - 6,2±0,3*〖10〗^(-6) мг/г ферментного препарата Патулин - 1,80±0,08*〖10〗^(-8) мг/г ферментного препарата В ходе работы также была доказана и проверена эффективность метода ультрафильтрации для избавления от присутствия МТ. В результате работы были отработаны и модифицированы методики пробоподготовки и анализа ряда микотоксинов, в том числе патулина и афлатоксинов Также была проведена градуировка хроматографа по стандартным растворам МТ, были получены моменты времени выхода МТ при модифицированных условиях. Более того, была проверена необходимость концентрирования в определении микотоксинов. Выяснилось, что при концентрировании пробы действительно увеличивается шанс детектировать присутствии и определить содержание МТ. В результате, было определено, что в ферментном препарате инулиназы, полученном без использования стадии ультрафильтрации содержатся следующие МТ: Афлатоксин G1 - 18±1,5 мкг/г ферментного препарата; Афлатоксин B1 - 6,2±0,3 мкг/г ферментного препарата; Патулин - 0,18±0,08 мкг/г ферментного препарата В ходе работы также была доказана и проверена эффективность метода ультрафильтрации для избавления от присутствия МТ. В ферментных препаратах после проведения ультрафильтрации не было обнаружено присутствие МТ.
- Добавил в систему: Зоров Иван Никитич