Аннотация:Ксантан – природный полисахарид, нашедший широкое применение благодаря ряду полезных свойств: высокой вязкости растворов, биобезопасности и химической устойчивости.
Тем не менее, известно крайне мало ферментов, обладающих специфической эндоксантаназной активностью. Такие белки потенциально имеют значительную практическую ценность для, например, нефтяной промышленности, где ксантан используется в качестве загустителя буровых растворов для разработки месторождений методом гидравлического разрыва пласта (ГРП).
Относительно недавно была обнаружена термофильная бактерия Thermogutta terrifontis, способная к разложению ксантана. Транскриптомное исследование показало, что бактерии этой линии, вероятно, способны продуцировать несколько белков, способных осуществлять гидролиз ксантана, в том числе β-1,4-гликозидные связи основной цепи. Среди них, наиболее подходящим на эту роль выглядит белок с неизвестной структурой DUF1080, ген которого обозначен THTE_1561.
Таким образом, целью данной работы являлось выделение в гомогенном виде фермента DUF1080 из ферментного препарата 3.537.1, полученного на основе рекомбинантного штамма Penicillium verruculosum №425.
Результаты работы:
1. Была определена массовая доля белка в ферментном препарате из штамма-продуцента P. verruculosum, трансформированного плазмидной ДНК, несущей ген THTE_1561 T. terrifontis. Она составила 17,7±0,4%.
2. Из ферментного препарата выделили в гомогенном виде предполагаемую эндоксантаназу DUF_1080 с помощью последовательных стадий хроматографического разделения. Проведение MALDI-TOF масс-спектрометрического анализа позволило подтвердить выделение целевого белка. Чистота полученной фракции была подтверждена с помощью ДСН-ПААГ-электрофореза.