Аннотация:РНК-связывающий белок G3BP1 является одним из ключевых компонентов стресс-гранул – немембранных органелл, образующихся в клетках животных при различных видах стресса. Стресс-гранулы состоят из нетранслируемых мРНК и целого ряда других участников, к которым относятся некоторые трансляционные факторы и мРНК-связывающие белки. Там же находятся малые субчастицы рибосом, которые, как принято думать, образуют некие неканонические комплексы с мРНК и белками, однако ни структурные, ни функциональные аспекты образования этих комплексов неизвестны.
В недавней работе по анализу данных eCLIP из клеток человека, выполненной в нашей лаборатории, были выявлены возможные контакты РНК-связывающего белка G3BP1 с рибосомной 18S РНК, что может указывать на прямое связывание этого белка с 40S субчастицей рибосомы. На наличие такого контакта указывают и некоторые другие данные из недавно опубликованных статей. Изучение деталей этого взаимодействия может пролить свет на механизм формирования стресс-гранул и на смысл образования неканонических рибосомных комплексов внутри них.
Целью данной работы было изготовление молекулярно-генетической конструкции для наработки рекомбинантного белка G3BP1 в клетках E.coli и выделение его в очищенном виде для дальнейшей проверки гипотезы об образовании им стабильного комплекса с 40S рибосомными субчастицами, структуру которого затем можно было бы исследовать с помощью крио-электронной микроскопии.