Исследование активности мутантных форм оксидазы D-аминокислот в окислении цефалоспорина C методом высокоэффективной жидкостной хроматографиикурсовая работа (Специалист)
Аннотация:Ферменты являются природными катализаторами, обладающими многочисленными достоинствами для технологии органического синтеза, такими как высокая каталитическая активность при умеренных температурах и давлении, а также высочайшая селективность. Тем не менее, несмотря на эти преимущества ферментов перед большинством гомогенных и гетерогенных катализаторов, их использование в промышленности остаётся ограниченным по причине низкой стабильности, сочетающейся с высокой стоимостью выделения и очистки. Ферменты разрушаются в результате воздействия высоких и низких температур, наличия в растворе сильных кислот, оснований, окислителей и восстановителей. Они ингибируются различными соединениями, в числе которых могут быть продукты и производные субстрата, что приводит к понижению селективности.
Всё вышесказанное показывает необходимость создания при помощи современных методов биоинформатики, молекулярной биологии и генной инженерии мутантных форм ферментов, обладающих повышенной по сравнению с природными аналогами стабильностью и улучшенными каталитическими свойствами. С этой целью, в нашей лаборатории проводят эксперименты по направленному мутагенезу оксидазы D-аминокислот из дрожжей Trigonopsis variabilis (TvDAAO). Так, ранее в нашей лаборатории были получены мутантные формы фермента DAAO из дрожжей Trigonopsis Variabilis Met104Leu и Met156Leu.
Целью данной работы является определение каталитических параметров мутантных форм фермента Met104Leu и Met156Leu.