|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Разработка новых индикаторных систем для флуоресцентного определения катехоламинов и флавоноидовкурсовая работа (Специалист)
- Научные руководители: Македонская М.И., Барсукова М.Е.
- Автор: Михайлова А.М.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Кафедра: Кафедра аналитической химии
- Год защиты: 2016
- Курс: 2
- Аннотация: Целью данной работы являлась разработка экспресс-методик определения флавоноидов (кверцетина, кофейной кислоты) и катехоламинов (дофамина, норадреналина) в присутствие миметиков пероксидазы хрена, выбор катализатора, наиболее эффективного для проведения второй стадии предложенной индикаторной реакции – ферментативной дериватизации продукта окисления ароматическим амином ДЭД. Предложены индикаторные системы для мультиплексного определения ряда катехоламинов (дофамина и норадреналина) и флавоноидов (кверцетин и кофейная кислота) с регистрацией флуоресцентного сигнала в 96-луночном полистирольном планшете. Системы основаны на получении интенсивно флуоресцирующих производных аналитов по реакции их дериватизации с ароматическим амином – мезо-1,2-дифенилэтилендиамином (ДЭД) в присутствии пероксидазы из корней хрена, Fe(III)-ТАМЛ и гемина. Выбраны условия регистрации флуоресцентного сигнала (λex 340, 350 нм, λem 458 – 500 нм) и условия проведения мультиплексного определения катехоламинов и флавоноидов в планшете (концентрации компонентов системы, время). В выбранных условиях разработаны флуоресцентные экспресс-методики определения дофамина и норадреналина, кверцетина и кофейной кислоты в полистирольном планшете по реакции их ферментативной дериватизации с ДЭД в присутствии пероксидазы из корней хрена в диапазонах концентраций: 0.25 – 2.5 мкМ, 0.05 – 0.5 мкМ, 0.1 – 10 мкМ, 0.1 – 10 мкМ, соответственно; в присутствии гемина в диапазонах концентраций: 0.1 – 1 мкМ, 0.025 – 0.25 мкМ, 1 – 10 мкМ, 1 – 10 мкМ, соответственно; и в присутствии Fe(III)-ТАМЛ в диапазонах концентраций: 0.25 – 2.5 мкМ, 0.075 – 0.75 мкМ, 2.5 – 10 мкМ, 2.5 – 10 мкМ, соответственно. В результате проведенных исследований в качестве наилучшего биокатализатора для реакции дериватизации катехоламинов и флавоноидов была выбрана пероксидаза из корней хрена (более низкие ПО (до 7 нМ), более высокая воспроизводимость (до 99 %) и коэффициенты корреляции (до 0.998)). Метрологические характеристики разработанных методик определения катехоламинов и флавоноидов демонстрируют возможность их применения для диагностики таких заболеваний, как феохромоцитома и нейробластома, а также для определения общей антиоксидантной активности организма.
- Добавил в систему: Македонская Мария Игоревна