|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Анализ трансляции репортерных мРНК в клетках с мутированными генами STRAP и CSDE1курсовая работа (Специалист)
- Научный руководитель: Дмитриев С.Е.
- Автор: Каримова Карина Марковна
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Кафедра: Факультет биоинженерии и биоинформатики
- Год защиты: 2025
- Курс: 3
- Аннотация: Инициация трансляции геномных РНК пикорнавирусов опосредуется участками внутренней посадки рибосом (IRES) – сложноорганизованными структурированными элементами РНК, расположенными в их 5′-нетранслируемой области. Для функционирования IRES-элементов риновируса (HRV) и полиовируса (PV) необходим почти полный набор канонических факторов инициации трансляции, за исключением кэп-связывающего белка eIF4E, а также вспомогательные белки (транс-действующие на IRES факторы, ITAF), не участвующие в канонической инициации. РНК-связывающий белок CSDE1/Unr взаимодействует с IRES-элементом HRV и стимулирует направляемую им трансляцию репортерных мРНК при добавлении в бесклеточную систему ретикулоцитов кролика. Показана также пониженная активность IRES-элементов HRV и PV в клетках, нокаутных по гену CSDE1. С CSDE1 взаимодействует белок STRAP/Unrip, не имеющий собственной IRES-связывающей активности, но присутствующий в комплексе IRES-элемента HRV с CSDE1. Однако ранее не проводилось систематического исследования влияния CSDE1 и STRAP на активность вирусных IRES-элементов разных типов, различающихся структурой и механизмами функционирования, на нокаутных моделях. Целью данной работы являлся анализ зависимости активности IRES-элементов различных вирусов от целостности генов CSDE1 и STRAP в культивируемых клетках человека. Для этого были проведены трансфекции культур моноклональных клеточных линий на основе HEK293T, имевших CRISPR/Cas-индуцированные мутации в генах CSDE1 или STRAP, либо клеток дикого типа бицистронными мРНК, кодирующими две люциферазы. 5'-проксимальный (кэп-зависимый) репортер служил внутренним контролем, тогда как трансляция второго репортера направлялась IRES-элементами разных вирусов, расположенными в межцистронной области. Также мы провели анализ трансляции вышеописанных мРНК в бесклеточных системах, полученных из этих клеточных линий.
- Добавил в систему: Дмитриев Сергей Евгеньевич