|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Применение метода флуоресцентной in situ гибридизации (FISH) в исследовании морских микроорганизмовкурсовая работа (Специалист)
- Научные руководители: Пименов Н.В., Брюханов А.Л.
- Автор: Корнеева В.А.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Кафедра: Кафедра микробиологии
- Год защиты: 2009
- Курс: 4
- Аннотация: Для идентификации и подсчета микроорганизмов, представленных в некоторых экосистемах необходимым становится развитие молекулярных методов, избегающих культивирования, которое позволяет охарактеризовать только организмы, способные расти на экспериментальных средах, в то время как значительная часть представителей микробных сообществ при этом упускается из виду, поскольку является некультивируемой. В последнее время одним из наиболее часто применяемых методов является флуоресцентная in situ гибридизация (FISH) с олигонуклеотидными зондами, специфичными для определенных последовательностей рибосомальной РНК. Вследствие своей быстроты и чувствительности данный метод является мощным инструментом для филогенетических, экологических, диагностических и др. исследований в микробиологии. С использованием видоспецифичных зондов становится возможной идентификация различных микроорганизмов в составе комплексных микробных сообществ, таким образом, позволяя изучать и межвидовые взаимодействия микроорганизмов. В наиболее ранних попытках гибридизации in situ, выполненных в конце 1960х годов, в качестве метки были использованы не флуоресцентные молекулы, а зонды, меченые радиоизотопами. Первое применение флуоресцентного определения in situ было осуществлено в 1980 году, когда молекула РНК была непосредственно помечена на 3' конце с помощью флуоресцентной молекулы (Bauman et al., 1980). Метод FISH для выявления нуклеиновых кислот был разработан как альтернатива более ранним методам, использовавшим радиоактивно меченые зонды. По сравнению с этими методами FISH позволила получить значительные улучшения в разрешении, скорости и безопасности, и в последствии проложить путь к развитию методов одновременного обнаружения множественных мишеней, численного анализа и получения изображений меченых клеток. В начале 1990х годов для улучшения мечения синтетических однонитевых зондов применялась химическая подготовка гибридизационных зондов, содержащих достаточное количество флуоресцентных молекул для применения в прямом определении. В настоящее время существует огромное разнообразие способов мечения (Bottari et al., 2006).
- Добавил в систему: Брюханов Андрей Леонидович