ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Разработан метод получения в индивидуальном виде мембранной формы (с якорем) и растворимой формы (без якоря) как соматического, так и тестикулярного ангиотензин-превращающего фермента.Показано сходство каталитических свойств растворимой и мембранной форм каждого изофермента в водном растворе. Использование обращенных мицелл АОТ в октане позволило установить, что молекула соматического АПФ имеет несферическую структуру, а молекула тестикулярного фермента - сферическую. Мембранная организация существенно влияет на четвертичную структуру обоих изоферментов. растворимый соматический АПФ способен функционировать в мицеллярной среде в виде мономера, компактного димера и тетрамера, а мембранный - в виде трех димеров различной формы и тетрамера. Растворимый тестикулярный фермент функционирует только в виде мономера, а мембранный в виде мономера и компактного димера. Показано, что образование димеров соматического АПФ происходит за счет присутствия в молекуле фермента углевод-распознающего центра, в то время как в образовании тетрамера соматического и димера тестикулярного АПФ углевод-распознающий центр не участвует. Наличие якоря в молекуле каждого изофермента АПФ обеспечивает его способность к взаимодействию с мембранной матрицей, что проявляется в резком изменении активности при фазовом переходе "обращенные мицеллы - ламеллы" и в зависимости ферментативной активности в системе обращенных мицелл от концентрации АОТ. Выявлены существенные отличия в величинах предельных каталитических констант р- и м-форм как соматического, так и тестикулярного АПФ в системе обращенных мицелл. Способность АПФ к взаимодействию с мембраной приводит к значительному повышению его активности, причем и двудоменный соматический и однодоменный тестикулярный ферменты в мембраносвязанном состоянии эффективнее функционируют в составе высокоорганизованных гомокомплексов. Наиболее высокий каталитический потенциал реализует мембранный тестикулярный фермент. Показаны новые пути регуляции активности АПФ, функционирующего в мембраносвязанном состоянии, структурой матрицы, осотавом среды и изменением олигомерного состояния фермента.