ИСТИНА

Степень разработанности темы исследования Опираясь на собственные работы (Охоботов Д.А. с соавт, 2007-2021), а также на работы отечественных и зарубежных авторов, в работе изучалась эффективность, а также вопросы биологической и клинической безопасности методов лечения мужской фертильности с помощью обогащенных клеточных культур и их продуктов. Для 4 выполнения одной из главных задач исследования, были проанализированы результаты лечения 292 пациентов с мужским фактором бесплодия и клинически здоровыми партнершами. Полученные данные позволили сделать предположение о том, что имеющиеся в арсенале репродуктолога методы лечения мужской инфертильности в настоящее время обладают сомнительной эффективностью, а использование вспомогательных репродуктивных технологий, у пар с мужским фактором, к сожалению, обладает 25-35% эффективностью на 1 попытку ЭКО-ИКСИ. Предложенный метод лечения инфертильности у мужчин с помощью обогащенных клеточных культур и их продуктов, был основан на анализе результатов экспериментальных исследований 20 групп животных (мыши, крысы, кролики, всего 164 животных), которым проводились трансплантации обогащенных культур костного мозга, жировой ткани, клеток плаценты и пуповины, клеток тестикулярной ткани, фетальных клеток, клеток, полученных от старых и молодых животных, в ксеногенном, аллогенном и аутологичном вариантах. Полученные данные позволили сделать важный вывод о том, что стволовые клетки способны дифференцироваться в условиях клеточной ниши и крайне уязвимы к внешним управляющим сигналам, поэтому опасны для клинического применения, в то время как альтернативно разрабатываемые клеточные продукты, представляющие собой белковые фракции, продуцируемые этими клетками и состоящие из факторов роста, цитокинов и хемокинов (клеточный секретом), дают сходный клинический результат, но при этом более стабильны и предсказуемы, а, следовательно, более безопасны. На основании полученных данных был запатентован новый препарат для стимуляции сперматогенеза, созданный на основе клеточных продуктов и в настоящее время проводится первая фаза клинических испытаний. Полученные результаты подтверждают то, что уже при нынешнем уровне развития науки, технологии, использующие возможности регенеративной медицины способны компенсировать повреждения сперматогенеза у мужчин. Таким образом, тема настоящей диссертационной работы представляется высоконаучной и может быть применена в репродуктологии, на базе клиник мужского и репродуктивного здоровья и исследовательских центров, но существует целый ряд спорных вопросов, касающихся различных клинических аспектов регенерации поврежденных тканей яичка, путем имплантации культур, обогащенных стволовыми и прогениторными клетками, а также их факторами роста, которые затрудняют клиническую практику и являются основанием для выбора научной темы. Цель исследования Улучшение результативности терапии пациентов с мужским бесплодием различной этиологии и разработка альтернативных современных методов лечения с помощью терапии стволовыми клетками и продуктами их секреции. Задачи исследования 1. Проанализировать эффективность консервативной терапии и вспомогательных репродуктивных технологий в лечении мужской инфертильности в зависимости от этиологических факторов, вызвавших нарушения сперматогенеза. 5 2. Определить группы риска на основе анализа неудачных исходов лечения с учетом возможностей консервативной терапии и вспомогательных репродуктивных технологий, у пациентов, имеющих различные факторы, провоцирующие инфертильность. 3. В экспериментальных исследованиях на животных моделях провести сравнительное исследование эффективности трансплантации культур стволовых/прогениторных клеток, выделенных из различных тканей, на восстановление нарушенного сперматогенеза, гормонального фона и фертильности животных. 4. Определить наиболее эффективные варианты проведения терапии обогащенными клеточными культурами. 5. Оценить возможность восстановления поврежденного сперматогенеза кондиционированными средами с секретомом мезенхимальных стволовых/прогениторных клеток жировой ткани (МСК ЖТ) в сравнении с трансплантацией обогащенных клеточных культур МСК ЖТ. 6. Провести анализ прогностической значимости метода терапии обогащенными клеточными культурами и кондиционированных сред с факторами роста мезенхимальных клеток жировой ткани по совокупным возможностям преодоления мужского бесплодия. Научная новизна исследования Впервые проведена оценка эффективности полного цикла лечения инфертильности у пар с мужским фактором инфертильности. Проанализированы неудачи и дан процентный прогноз на получение беременности в паре, где мужчины имеют то или иное заболевание, в том числе воспалительных заболеваниях простаты (патент РФ № RU2408378C2 «Способ лечения хронического простатита»), нарушающее процессы сперматогенеза и фертильность. Впервые дана комплексная сравнительная оценка эффективности терапии культурами, обогащенными стволовыми и прогениторными клетками в различных тканеспецифичных вариантах и сочетаниях (патент РФ № RU2653779C1 «Способ стимуляции сперматогенеза»). Проведен ряд сравнительных анализов по изучению эффективности методов клеточной терапии на животных моделях. Подтверждена клинически значимая эффективность и превосходство билатеральной подкапсульной терапии культурами в ксеногенном, аллогенном и аутологичном вариантах над монолатеральной, доказана разница в клинической эффективности использования культур, полученных от старых и молодых животных, исследован клинический эффект использования культур, полученных из плаценты и пуповины человека и их влияние на восстановление нарушенного сперматогенеза, гормонального фона и фертильности животных. Определена минимальная терапевтичеcкая клеточная доза, которая обуславливает эффективность терапии, для различных видов культур. Проведен комплексный иммуногистохимический маркерный анализ тканей реципиентов с исследованием активности стволовости, функциональной активности, дифференцировки и пролиферации стволовых клеток до и после экспериментальной 6 терапии клеточными культурами. Исследовано влияние различных индукторов клеточной дифференцировки и изучено их влияние на качество восстановления сперматогенеза. Впервые продемонстрирована безопасность использования кондиционированных сред с секретомом культур стволовых/прогениторных клеток, выделенных из мезенхимальных клеток жировой ткани, и их возможности по восстановлению нарушенного сперматогенеза и гормонального фона у животных, в сравнении с использованием этой же клеточной культуры и контролем (патент РФ № RU2652902С1 «Способ стимуляции сперматогенеза»). Теоретическая и практическая значимость работы 1. Проведен комплексный анализ качества и эффективности восстановления сперматогенеза и фертильности в эксперименте, с помощью культур, обогащенных стволовыми/ прогениторными клетками в ксеногенном, аллогенном и аутологичном вариантах на животной модели двухстороннего абдоминального крипторхизма. 2. Определена минимальная терапевтическая доза клеток для эффективного восстановления сперматогенеза, для культур различных видов и происхождения. 3. Подтверждена эффективность подкапсульного введения культур, обогащенных стволовыми/прогениторными клетками различного происхождения. 4. Разработана методология всех компонентов и этапов терапевтического цикла, проверка фактора билатеральности введения и иммуногистохимический маркерный анализ всех этапов клеточной дифференцировки. 5. Проведена оценка сравнительной эффективности лечения различных форм мужской инфертильности. 6. Проведен анализ и выявлены корреляции взаимной факторной отягощенности и их влияния на успешность восстановления сперматогенеза. 7. Проведены исследования восстановления функции сперматогенного эпителия кондиционированными средами с факторами роста (секретомом) мезенхимальных стволовых и прогениторных клеток жировой ткани на крипторхической модели. 8. На основе секретома стволовых и прогениторных мезенхимальных клеток жировой ткани человека создан стимулирующий препарат, который в настоящее время проходит 1 фазу клинических испытаний.