ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Внутрибольничные инфекции в настоящее время являются актуальной и серьёзной проблемой. Одними из возбудителей этих инфекций традиционно считаются бактерии рода Klebsiella. Эти патогены вызывают пневмонию, сепсис, воспаление мочеиспускательной системы, проблемы с печенью и почками, а их резистентность к антибиотикам с каждым годом возрастает. Известно, что при обработке антибактериальными агентами эти бактерии переходят в состояние биоплёнки, в котором их устойчивость значительно повышается. Особо остро проблема биоплёнок клебсиелл стоит в области трансплантологии суставов. В среднем каждая 25-30-я операция сопровождается сепсисом, вызванным стафилококком или клебсиеллой, которые в этом случае в организме существуют именно в виде биопленок. Поэтому поиск способов борьбы с такими биоплёнками является актуальным на настоящий момент. При проведении совместного культивирования бактерий рода Lactobacillus и бактерий рода Klebsiella оказалось, что существует два штамма лактобактерий - Limosilactobacillus reuteri LR1 и Lacticaseibacillus rhamnosus F, которые проявляют антагонистическое действие к бактериям Klebsiella. Эти штаммы особо интересны потому, что они входят в состав собственной микробиоты кишечника человека, а значит, белки, которые они синтезируют, с высокой долей вероятности не будут вызывать иммунный ответ. Был проведён протеомный анализ как свободных L. reuteri и L. rhamnosus, так и при их совместном культивировании с бактериями рода Klebsiella, и оказалось, что в ответ на действие патогена лактобактерии синтезируют ряд белков, способствующих подавлению роста клебсиелл. Анализ с помощью тандемной MALDI/TOF/TOF спектрометрии показал, что среди этих белков есть гидролазы, способствующие разрушению пептидных сшивок в пептидогликане клебсиелл или углеводного остова этого пептидогликана, белки, гидролизующие нуклеиновые кислоты, а также белки метаболизма, которые синтезируются только в ответ на присутствие клебсиелл. Одним из таких ферментов является рибонуклеозидгидролаза С (RihC) из L. reuteri. RihC катализирует реакцию расщепления рибонуклеозидов до азотистых оснований и рибозы. Этот фермент относится к семейству рибонуклеозидгидролаз, включающему в себя ряд ферментов: IG-NH, IAG-NH, RihA, RihB и RihC. IG-NH и IAG-NH являются пурин-специфическими гидролазами, RihA и RihB являются пиримидин-специфическими гидролазами, тогда как RihC катализирует реакции как с пиримидинами, так и с пуринами. Не до конца ясна физиологическая роль данного фермента в лактобактериях и то, почему он синтезируется именно в ответ на присутствие патогенов. В данной работе был клонирован фермент RihC из L. reuteri и проведена его комплексная структурная и функциональная характеристика, а именно: изучены кинетические свойства с широким рядом субстратов для двух форм фермента, изучена термостабильность двумя методами, рассчитаны активационные параметры инактивации белка, успешно получены кристаллы, разрешена пространственная структура, проведён анализ активного центра и взаимосвязь его структуры со свойствами белка.
№ | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
---|---|---|---|---|---|
1. | Сведения о научном руководителе | Shaposhnikov_Svedeniya_o_nauchnyih_rukovoditelyah.pdf | 243,7 КБ | 5 апреля 2024 | |
2. | Отзыв на автореферат | 19_Shaposhnikov_Dopolnitelnyij_otzyiv_na_avtoreferat_Pokrov… | 1,6 МБ | 6 мая 2024 | |
3. | Отзыв на автореферат | 19_Shaposhnikov_Dopolnitelnyij_otzyiv_na_avtoreferat_Bunik.… | 222,9 КБ | 6 мая 2024 | |
4. | Отзыв официального оппонента | 18_Shaposhnikov_Otzyiv_opponenta_Rubtsova.pdf | 835,8 КБ | 6 мая 2024 | |
5. | Отзыв официального оппонента | 18_Shaposhnikov_Otzyiv_opponenta_Demidyuk.pdf | 576,7 КБ | 6 мая 2024 | |
6. | Отзыв официального оппонента | 18_Shaposhnikov_Otzyiv_opponenta_Zhdanov.pdf | 543,1 КБ | 6 мая 2024 | |
7. | Отзыв на автореферат | Shaposhnikov_Otzyiv_na_avtoreferat_Gottih.pdf | 79,7 КБ | 8 мая 2024 | |
8. | Отзыв научного руководителя/консультанта | Shaposhnikov_Otzyiv_rukovoditelej.pdf | 219,8 КБ | 29 марта 2024 | |
9. | Полный текст диссертации | Disser_Shaposhnikov_20240405_1.pdf | 9,2 МБ | 6 апреля 2024 | |
11. | Заключение диссертационного совета по диссертации | Shaposhnikov_Zaklyuchenie_dissertatsionnogo_soveta_20240519… | 212,5 КБ | 20 мая 2024 | |
12. | Сведения об официальных оппонентах, включая публикации | Shaposhnikov_Svedeniya_ob_ofitsialnyih_opponentah_2.pdf | 221,8 КБ | 6 мая 2024 | |
13. | Отзыв на автореферат | 19_Shaposhnikov_Dopolnitelnyij_otzyiv_na_avtoreferat_Yaropo… | 178,9 КБ | 8 мая 2024 |