ИСТИНА

Целью диссертационной работы был анализ влияния делеций и точечных аминокислотных замен в N-концевом домене некоторых sHsp человека на их структуру и физико-химические свойства, процессы гомо- и гетероолигомеризации, а также взаимодействия с белками-партнерами. Было показано, что α-кристаллиновые домены HspB1, HspB5 и HspB6 в растворе представлены в виде димеров, а α-кристаллиновые домены HspB7 и HspB8 - в виде мономеров. Полученные α-кристаллиновые домены были использованы, как модели для изучения процессов включения субъединиц в состав крупных олигомеров малых белков теплового шока. В частности, было показано, что введение отрицательных зарядов в N-концевой домен HspB1 дестабилизирует крупные олигомеров, что способствует включению изолированных α-кристаллиновых доменов в состав олигомера. При более детальном рассмотрении элементов первичной структуры N-концевого домена было выяснено, что консервативный мотив sRLFDQxFG в N-концевом домене играет важную роль в формировании гетероолигомеров малых белков теплового шока. Так делеция SRLFD последовательности или замена R/A в случае HspB1 и HspB5 дестабилизирует крупные олигомеры и облегчает формирование гетероолигомеров с HspB6. Аналогичная делеция и замена R/A в HspB6 наоборот затрудняют формирование гетероолигомеров с HspB1 и HspB5. Показано, что точечные аминокислотные замены S10F и P20L в N-концевом домене HspB6, ассоциированные с развитием кардиомиопатий, приводят к увеличению поверхностной гидрофобности, усилению самоассоциации и увеличению шапероноподобной активности на модельных белках-субстратах, но не влияют на способность HspB6 образовывать гетероолигомеры с HspB1 и HspB5. Было показано, что HspB7 в растворе представлен в виде малых олигомеров, а HspB8 - в виде мономеров и первые 29 N-концевых остатков могут участвовать в олигомеризации и агрегации HspB7, а необычное олигомерное состояние HspB8 определяется в первую очередь особенностями структуры его α-кристаллинового домена.