ИСТИНА

В работе затронута чрезвычайно актуальная тема роли структуры поверхностных белков в формировании вирионов. Представлены новые подходы изучения структурных элементов поверхностных белков оболочечных вирусов, для которых получение информации традиционными методами (РСА, ЯМР) затруднено или невозможно ввиду гидрофобности и структурной неупорядоченности белковой последовательности и наличия ковалентной липидной модификации. С использованием методов ограниченного протеолиза и масс-спектрометрического анализа пептидов получено несколько важных результатов. На огромном вирусологическом материале впервые показано, что не только эктодомены (что было давно известно из данных РСА), но и линкерные и/или трансмембранные последовательности гемагглютинина вируса гриппа обладают четвертичной структурой (наиболее вероятно, организованы в виде гомотримеров). Эта структура, по-видимому, является подтип-специфичной и значительно различается для эволюционных групп гемагглютинина. В сочетании с информацией, полученной методом симуляций молекулярной динамики, очевидно, что гомотримерная организация трансмембранных доменов серьезно различается для гемагглютининов, принадлежащих к Группе-1 и Группе-2 вируса гриппа А и в случае вируса гриппа В. Мы полагаем, что наиболее плотно «упакованы» ТМ-домены НА Группы-2 вируса А, а наименее плотно - трансмембранные домены НА вируса типа В. С использованием специально разработанного протокола для исследования гидрофобных (липид-содержащих) пептидов методами масс-спектрометрии были собраны данные о дифференциальном ацилировании остатками высших жирных кислот консервативных остатков цистеина, расположенных в трансмембранном и цитоплазматическом доменах НА вирусов гриппа А и В и белка HEF вируса гриппа С. Выявлено приоритетное присоединение остатка стеарата только к остатку цистеина, слегка погруженному в мембрану, в то время как сайты ацилирования в цитоплазматическом домене могут быть модифицированы исключительно пальмитатами. Работа проведена с использованием более 40 различных штаммов и лабораторных реассортантов вируса гриппа, а также ряда оболочечных вирусов, принадлежащих к другим семействам. Перспективы развития предложенных направлений многообразны и включают проблему взаимодействия компонентов вириона оболочечных вирусов, которая интересна как с точки зрения фундаментального понимания разнообразия белок-белковых и белок-мембранных взаимодействий в биологических надмолекулярных структурах, так и в плане развития новых антивирусных стратегий.