ИСТИНА

Данная диссертационная работа состоит из двух частей. Цель первой части заключается в изучении влияния случайных мутаций на уровень экспрессии, каталитические свойства и температурную стабильность мутантных форм, полученных при клонировании гена ПА с геномной ДНК бактерий Alcaligenes faecalis. Задачи первой части исследования включали анализ нуклеотидных последовательностей гена AfПА на наличие мутаций, возникших при клонировании методом ПЦР; отбор плазмид с мутациями; культивирование рекомбинантных штаммов E.coli, трансформированных отобранными плазмидами; сравнительная характеристика свойств AfПА со случайными мутациями. В рамках первой части также была поставлена задача провести детальную характеристику рекомбинантной AfПА дикого типа. Цель второй части работы состоит в получении и изучении свойств одноцепочечной (пермутированной) формы фермента. Задачи работы включали компьютерное моделирование двух вариантов одноцепочечной П; получение с помощью ПЦР генетических конструкций, кодирующих два варианта одноцепочечной ПА; секвенирование генов для подтверждения нужной последовательности; оптимизация условий культивирования и получение высокоочищенных препаратов одноцепочечных ПА; характеристика свойств двух вариантов одноцепочечной ПА.