ИСТИНА

Изобретение относится к области биотехнологии.Предложен способ получения белка Bgl2p-гомолога антигена-маркера возбудителей микозов человека и животных. Высушенную биомассу коммерческих дрожжей Saccharomyces cerevisiae замачивают в среде культивирования в течение 15-30 минут при 27-33°C. Затем осаждают клетки центрифугированием в течение 2-5 минут при 1500-2500 g и при комнатной температуре. Полученный осадок отмывают в тех же условиях дистиллированной водой. Отмытые клетки ресуспендируют в дистиллированной воде и замораживают при температуре от -20 до -79°C. После чего клетки размораживают при комнатной температуре. Добавляют толуол до конечной концентрации 1-5%. Полученную смесь инкубируют на качалке при 120-180 об/мин и температуре 35-45°C в течение 45-90 часов. Затем смесь центрифугируют, получают осадок клеточных стенок, который промывают дистиллированной водой и повторно центрифугируют в течение 0,5-5 минут при 2000-10000 g. Полученный осадок повторно ресуспендируют в дистиллированной воде и обрабатывают ультразвуком с частотой 20-30 килогерц с мощностью 30-50 ватт с охлаждением на льду в течение 2-5 минут с промежутком 30 секунд каждые 20-40 секунд. Далее клеточные стенки осаждают центрифугированием при 2000-10000 g. Проводят промывки осадка ресуспендированием и последующим центрифугированием при комнатной температуре в растворе 0,1-1% Тритона Х-100 один раз, в растворе 0,2-1М NaCl три раза, в 1-2% растворе сахарозы один раз и три раза дистиллированной водой. Целевой продукт экстрагируют из клеточных стенок в дистиллированную воду при нагревании до 70-100°C в течение 5-15 минут. После чего двукратным центрифугированием при 3000-10000 g пo 2-10 минут отделяют супернатант, содержащий целевой белок. Изобретение позволяет получать белок Bgl2p с выходом 70-100 мкг на грамм сухих дрожжей и степенью чистоты не менее 95 %. 1 ил., 6 пр.