![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Изобретение относится к биохимии. Способ получения ферментов фага SPZ7 из коллекции федерального государственного научного учреждения "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии", заключается в следующем. В бульон Хоттингера вносят культуру Salmonella enteritidis и подращивают ее. В полученную культуру добавляют очищенный фаголизат SPZ7 и культивируют с аэрацией. Осаждают клетки Salmonella enteritidis на центрифуге. Полученные клетки помещают в 0,05 М трис-HCl буферную смесь с рН 7,0, содержащую рибонуклеазу, культивируют. Добавляют этилендиаминтетраацетат до концентрации 5 мМ и полученную суспензию центрифугируют, супернатант отделяют от осадка и фильтруют. Затем фермент осаждают добавлением (NH4)2SO 4 до 100%-ного насыщения при температуре 0°С. Осадок белка растворяют в буферной смеси, полученный раствор фермента вносят в хроматографическую колонку с декстраном модифицированным, уравновешенным буферной смесью 0,02 М трис-HCl с рН 7,5, содержащей 0,15 М NaCl и 1 мМ этилендиаминтетраацетата, хроматографическое разделение производят со скоростью подачи элюента - 24 мл/ч, полученный раствор фермента подвергают дальнейшей очистке с помощью ионообменной хроматографии. Хроматографическое разделение производят при температуре 2-3°С со скоростью подачи элюента - 35 мл/ч, выделяют и объединяют фракции, содержащие 70% общей активности фермента. Изобретение позволяет исключить множественные противопоказания и побочные эффекты, имеющие место при применении препаратов живых фагов.