ИСТИНА

Тест-система, рассчитанная на 50 реакций, для прогнозирования развития метастазов у больных колоректальным раком на основании уровня микро-РНК miR-26a и miR-143 в плазме крови, включающая реагенты для получения кДНК на матрице тотальной РНК с помощью реакции обратной транскрипции, совмещенной с полиаденилированием, амплификации библиотеки кДНК в режиме реального времени (ПЦР-РВ) и контрольные смеси, отличающаяся тем, что используют смесь для ОТ-реакции: 2-х поли А-буфер, 20 ед./мкл M-MuLV, 0,2 мМ dNTPs, 2 мМ АТФ, 1 ед./мкл Poly(A)-полимеразы и ПЦР-РВ реакции: 1 мМ dNTPs, 6,6 мМ MgCl2, 4-х ПЦР-буфер с 4-х EvaGreen Dye, ДНК-полимеразу Thermus aquaticus 5 ед./мкл и высокоспецифичные праймеры для hsa-miR-7-5p: F:CGCAGTGGAAGACTAGTGA (SEQ ID №1); R:GTCCAGTТТТТТТТТТТТТТТAACAACA (SEQ ID №2); RT:CAGGTCCAGTТТТТТТТТТТТТТТAA (SEQ ID №3); для hsa-miR-26a-5p: F:GCAGTTCAAGTAATCCAGGATAG (SEQ ID №4); R:GGTCCAGTТТТТТТТТТТТТТТAGC (SEQ ID №5); RT:CAGGTCCAGTТТТТТТТТТТТТТТAG (SEQ ID №6) и для hsa-miR-143-3p: F:CAGTGAGATGAAGCACTGTAG (SEQ ID №7); R:GGTCCAGTТТТТТТТТТТТТТТGAG (SEQ ID №8); RT:CAGGTCCAGTТТТТТТТТТТТТТТGA (SEQ ID №9); проводят две амплификации: контрольную и основную, анализируют первичные данные и рассчитывают коэффициент (К) относительной экспрессии: - рассчитывают среднее геометрическое Ct по трём повторам для целевой и референсной микро-РНК, - далее рассчитывают величину ΔCt = Ct(hsa-miR-26a-5p/hsa-miR-143-3p) - Ct(hsa-miR-7-5p); - коэффициент относительной экспрессии (K) рассчитывают по формуле 1.9-ΔCt, сравнивают полученные значения К с интервалом прогностического коэффициента экспрессии, и при значении КmiR-26a≤2,56*10-3 и КmiR-143≤10,02*10-3 прогнозируют развитие метастазов, при значении КmiR-26a ≥3,89*10-3 и КmiR-143 ≥17,11*10-3 прогнозируют течение заболевания без отдаленных и регионарных метастазов, а при значениях коэффициента K между указанными интервалами считают полученный результат неопределенным.