![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Способ моделирования воспалительного процесса в тканях репродуктивных органов женщин, включающий получение клеточной культуры, инфицирование штаммом Е Chlamydia trachomatis, отличающийся тем, что ткань желтого тела, выделенного из биопсийного материала в пролиферативную фазу менструального цикла, гомогенизируют при комнатной температуре в культуральной среде RPMI-1640 «Seromed», затем полученную клеточную смесь центрифугируют в течение 10 минут при 1000 оборотов в минуту, супернатант удаляют, осадок клеток отмывают в среде RPMI, оценивают выделенные клетки в инвертированном микроскопе MicroStar «Reichert» и переносят в ростовую среду, содержащую RPMI-1640 с 15% эмбриональной телячьей сывороткой «Seromed», 2 ммоль/л глутамина и 150 Υ/мл гентамицина, для выращивания клеток используют матрацы из нейтрального стекла объемом 100 мл, ростовую среду вносят в количестве 15 мл; на 3-и сутки заменяют 1/3 объема среды культивирования, на 6-й день образовавшийся монослой снимают со стекла 0,02% раствором Версена с хемотрипсином, центрифугируют в течение 10 минут при 1000 оборотов в минуту, удаляют надосадочную жидкость, клеточный осадок ресуспендируют в той же среде до дозы 2,0×10 5 клеток в 1 мл и переносят по 1 мл в пенициллиновые флаконы, на дно которых предварительно помещают покровные стекла размером 7×7 мм, через 36 часов ростовую среду удаляют из флаконов, сформировавшийся монослой клеток еще раз промывают той же средой, затем во флаконы вносят по 40 мл культуры Chlamydia trachomatis, центрифугируют с использованием центрифуги с горизонтальным ротором при 2500 оборотов в минуту в течение 1 часа, образцы инкубируют при 37°C в течение 72 часов, затем покровные стекла извлекают из флаконов, подсушивают на воздухе и фиксируют охлажденным ацетоном в течение 10 минут, окрашивают и при микроскопии выявляют обилие клеток эксплантата с выраженными признаками деструкции, с ретикулярными тельцами и переходными формами возбудителя, экзоцитоз хламидий, лизис инфицированных клеток на фоне клеточного детрита и голых ядер, присутствие клеток, весь объем которых заполняли зрелые бочонкообразные включения Chlamydia trachomatis с заметным уплотнением поверхностных структур, увеличением периплазматического пространства.
№ | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
---|---|---|---|---|---|
1. | Полный текст | 2539031 | 2539031.pdf | 366,3 КБ | 2 августа 2023 [KorotkovaNA] |