Роль геохимической деятельности почвенных микроорганизмов в поддержании стабильности наземных экосистемНИР

The role of geochemical activity of soil microorganisms in maintaining the stability of terrestrial ecosystems

Источник финансирования НИР

госбюджет, раздел 0110 (для тем по госзаданию)

Этапы НИР

# Сроки Название
1 1 января 2016 г.-31 декабря 2016 г. Этап 2016 года
Результаты этапа: В рамках задач этапа 2016 г. проводили экспериментальные исследования содержания, состава и активности почвообитающих микробных сообществ, участвующих в круговороте N, с использованием классических методов выделения и учета микроорганизмов, инструментальных методов оценки метаболической активности пула микроорганизмов, и новейших мелекулярно-филогенетических подходов, предложены модификации методов для возможности анализов почвенных образцов. В результате исследования впервые показано, что: 1) активность почвенных микробных сообществ может определяться средообразующей деятельностью почвообитающих животных-фитофагов (бобров, песчанок, муравьев) в местах их обитания обитания; 2) существенную роль в процессе нитрификации, помимо автотрофных и гетеротрофных микроорганизмов, играют амонийокисляющие археи, особенно в ненарушенных экоценозах и в кислых почвах, проведен анализ нитрифицирующей активности архей в основных типах почвах европейской части России; 3) хитинолитический прокариотный комплекс вносит значительный вклад в разложение хитина в почвенном, наземном и надземном ярусах зональных типов почв Евразии, для его функциональной активности увлажнение является определяющим экологическим фактором, проведена оценка численности и выявлен филогенетический состав метаболически активных бактериальных хитинолитических комплексов наземных экосистем. Полученные данные позволяют уточнить составляющие баланса биологического азота в почвах, а также изменения характера трансформации азота в почвах в условиях меняющегося климата и антропогенной трансформации почв.
2 1 января 2017 г.-31 декабря 2017 г. Этап 2017 года
Результаты этапа: В работе исследовались микробные сообщества и их влияние на цикл углерода и азота в различных экосистемах. Локализация сообществ была различной: изучали комплекс диазотрофных микроорганизмов копролитов дождевых червей разных экологических групп, пищеварительный тракт почвообитающих личинок комаров типулид с различной пищевой специализацией, исследовали динамику процессов аммонификации и денитрификации в серых лесных залежных и интенсивно используемых в сельском хозяйстве почвах, были изучены гидролитические сообщества прокариот в современных и погребенных почвах, дана их структурно-функциональная характеристика. Цель работы: получение новых сведений о вкладе микроорганизмов в природе в цикл азота и углерода, влиянии параметров экосистемы на интенсивность процессов трансформации биофильных элементов, исследование роли бактериальных комплексов в деградации биополимеров (например, хитина) в различных гидротермических условиях. В исследовании использовали классические современные методы изучения биологической активности микроорганизмов: газо-хроматографические методы, методы посева, методы прямого учета с помощью люминесцентной микроскопии, интегральный метод мультибстратного тестирования, позволяющий изучить потенциал микробного сообщества в потреблении субстратов в сравнительном аспекте, а так же молекулярно-биологические методы, в частности, метагеномный анализ для изучения таксономической и функциональной структуры сообщества современных и погребенных почв. В результате исследования было показано, что 1) почвенные беспозвоночные оказывают существенное влияние на ассоциированных с ними диазотрофов, определяют параметры активности азотфиксации, денитрификации и иных показателей биологической активности микробных сообществ в зависимости от особенностей своей экологии и видовой принадлежности, определяя, таким образом азотный режим окружающей почвы; 2) было установлено, что антропогенная нагрузка во многом определяет функциональный состав микроорганизмов азотного цикла в агроценозах, находящихся в активном сельскохозяйственном использовании; 3) впервые молекулярно-биологическими методами был исследован комплекс гидролитических микроорганизмов погребенных и современных почв, было показа возможность реактивации микроорганизмов погребенных почв для исследования их физиологической активности. Область применения: результаты работы расширяют наши представления о вкладе микроорганизмов в осуществлении глобального круговорота биофильных элементов – азота и углерода, помогает понять механизмы формирования симбиозов разных групп организмов в природе; поиски новых экологических ниш, занятых функционально специфическими сообществами микроорганизмов может быть перспективным для развития биотехнологии.
3 1 января 2018 г.-31 декабря 2018 г. Этап 2018 года
Результаты этапа: С помощью математического планирования показана принципиальная возможность решения оптимизационной задачи с определением оптимальных значений факторов (температуры и сукцессионного времени) для функционального показателя (дыхания) микробного гидролитического комплекса, развивающегося в почвах разных типов. В работе установлена высокая активность при гидролизе полисахаридов вне зависимости от температуры минорных по биомассе компонентов микробного комплекса – мицелиальных и одноклеточных прокариот, которые, как показано, вносят существенный вклад в контролирование дыхания микробного сообщества в широком спектре условий (температура, влажность, поступление органического вещества, сукцессионное время). При этом роль актиномицетов особенно велика в процессах деструкции хитина. Установлено, что анаэробная трансформация хитина протекает с разной интенсивностью в почвах при исследуемых уровнях влажности и матричного потенциала. Интервал значений влажности для анаэробной трансформации хитина в разных почвах имеет свою величину. В почвах с большим содержанием илистых фракций (серая лесная, ЭПЧ < 1мкм — 28%) коэффициент трансформации хитина возрастал в области больших значений влажности, а для песчаных почв ─ в области меньших (глее-слабоподзолистая ЭПЧ < 1мкм — 5%). Существует зависимость между интенсивностью трансформации хитина в анаэробных условиях и радиусом пор, занятых водой. В зависимости от уровня увлажненности, температурного и окислительно-восстановительного режимов и времени сукцессии разработанная модификация флюоресцентномикроскопического метода гибридизации in situ (FISH) дала возможность оценить численность и выявить филогенетический состав метаболически активных бактериальных гидролитических (хитинолитических и пектинолитических) комплексов вертикальных ярусов наземных экосистем. Оказалось, что численность метаболически активных клеток гидролитических комплексов составляет третью часть от численности всех прокариотных организмов надземного, наземного и почвенного ярусов биогеоценозов, определяемой окрашиванием акридиновым оранжевым.
4 1 января 2019 г.-31 декабря 2019 г. Этап 2019 года
Результаты этапа: В ходе проведенной работы обнаружена высокая интенсивность окисления метана в олиготрофной торфяной почве. Сделано предположение о том, что метан в этих условиях может быть использован диазотрофными бактериями в качестве энергетического источника. Определение активности азотфиксации олиготрофной торфяной почвы в присутствии метана показало резкий рост нитрогеназной активности. Важно отметить, что в присутствии метана нитрогеназная активность оказалась более высокой, даже по сравнению с вариантом с глюкозой. Установлено преимущественное поглощение закиси азота верхним горизонтом олиготрофного торфяника, что позволяет рассматривать эти экосистемы как природный сток для закиси азота. Показано, что микробных сообществах осушенных торфяных почв большое значение играют трудно культивируемые таксоны, такие как Thaumarchaeota, Verrucomicrobia, Acidobacteria, Planctomycetes. Большая их роль отмечается в почвах, используемых под пашню. В загрязненных почвах распашка снижает эффективность аэробного разложения дизельного топлива, но по мере истощения запасов легкодоступной органики в старопахотных торфяных почвах оно становится более подходящим субстратом для микроорганизмов. Выделение метана при внесении дизельного топлива и без в пахотных почвах выше, чем в ненарушенных – однако с ростом продолжительности и деградацией анаэробного блока оно снижается. Внесение сырой нефти подавляет физиологическую активность микроорганизмов по сравнению с вариантами с внесением дизельного топлива и контролем. Дизельное топливо при потреблении микроорганизмами приводит к их азотному голоданию. Это подавляет активность денитрификаторов и стимулирует азотфиксацию. Наиболее ярко это проявляется в ненарушенной почве. Под пашней рост азотфиксации меньше, а его величина связана с содержанием минеральных форм азота в почве. Внесение дизельного топлива вызывает подавление представителей Crenarchaeota и развитие в различных случаях Euryarchaeota или Thaumarchaeota. Бактериальные сообщества исследованных почв сохраняют свой состав при внесении дизельного топлива на уровне филумов и отдельных классов. Показано, что загрязнение нефтью приводит к снижению метаболически активной прокариотной биомассы в торфяной почве, доля которой составляет 5% от всех выявляемых прокариот. Установлено, что внесение в загрязненный нефтью торф полного минерального питания на фоне известкования (0,5 Нг) приводит к возрастанию (более чем в 2 раза) биомассы метаболически активных клеток бактерий и архей. Определено изменение филогенетической структуры метаболически активного прокариотного комплекса как домена Archaea, так и Bacteria в загрязненных нефтью торфах по сравнению с фоном. Внесение полного минерального питания на фоне неполного известкования приводит к восстановлению структуры прокариотного комплекса. Впервые выявлена филогенетическая структура домена Archaea для исследуемых почвенных образцов, загрязненных нефтью при разных значениях давления почвенной влаги.
5 1 января 2020 г.-31 декабря 2020 г. Этап 2020 года
Результаты этапа: На основе экофизиологических критериев определена функциональная значимость гидролитических микробных комплексов в наземных экосистемах, выявлена степень толерантности исследуемых микробных сообществ к экстремальным параметрам экологических факторов. Установлена возможность классификации и биодиагностики образцов наземных экосистем по структурному показателю микробного комплекса, в том числе по его гидролитической составляющей. Выявленное возрастание потенциальной активности сообществ по мере увеличения степени «законсервированности» открывает возможности для биотехнологического использования штаммов, выделенных из реликтовых местообитаний. Была обнаружена новая функция актинобактерий (мицелиальных форм) в развитии гидролитического комплекса. Оказалось, что дыхание комплекса в широком диапазоне значений (влажности, поступления органического вещества, сукцессионного времени) может существенно контролироваться актиномицетами, роль которых определяется не столько их непосредственной гидролитической активностью, сколько вкладом в контроль функционирования микробного комплекса, по-видимому, посредством характерной для актиномицетов продукции биологически активных веществ, в данном случае − с регуляторной функцией. Эти результаты были подтверждены обнаружением в почвенных образцах функциональных генов. Так, методом «вложенного» ПЦР-анализа (nested PCR) с использованием специфических праймеров было выявлено наличие хитиназного гена (chiA) группы А (семейства гликозилгидролаз) в почвенных микробных комплексах in situ и чистых культурах микроорганизмов, изолированных из исследуемых почв. По результатам сиквенс-анализа полученных последовательностей хитиназного гена он принадлежал представителям ряда некультивируемых бактерий и филогенетических групп Actinobacteria и Firmicutes. Внутри домена Bacteria при оптимальных для жизнедеятельности большинства микроорганизмов условиях (влажность 60% от полной влагоемкости, температура 27оС) среди хитинолитических и пектинолитических доминантов исследуемых почв выявляются представители филумов Firmicutes и Actinobacteria. С возрастанием влажности и понижением температуры отмечается увеличение представителей филума Proteobacteria (альфа- и бета- классов), а с уменьшением влажности и возрастанием температуры в прокариотном микробном комплексе усиливается роль филума Actinobacteria, что демонстрирует регуляторную роль комбинаций экологических параметров для изменения филогенетического состава гидролитических комплексов. Таким образом, совокупность методов молекулярно-генетического анализа гидролитических прокариотных комплексов позволила пополнить перечень и отметить разнообразие микроорганизмов−гидролитиков. Полученные результаты предполагают наличие горизонтального переноса хитиназных генов, как большинства генов биодеградации, локализованных в плазмидной ДНК, внутри микробного комплекса. В приведенных исследованиях получена новая информация, интересная для понимания закономерностей стабильного существования и развития прокариотных гидролитических комплексов и важная для решения ряда почвоведческих и биотехнологических задач. В настоящее время на кафедре биологии почв имеется значительное количество штаммов, проявляющих высокую биологическую активность в отношении деструкции нефтепродуктов, пестицидов, разрушения (гидролиза) природных полимеров, продуцентов фитогормонов и антагонистов фитопатогенов. Имеющаяся коллекция позволяет проводить поиск активных продуцентов не только среди чистых культур, но и среди устойчивых ассоциаций культур, способных к активному проведению процесса азотфиксации за счет синтрофии и кометаболизма.

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".