Развитие технологии редактирования генома мышейНИР

Development of mice genome editing

Источник финансирования НИР

госбюджет, раздел 0110 (для тем по госзаданию)

Этапы НИР

# Сроки Название
1 1 января 2019 г.-31 декабря 2019 г. Развитие технологии редактирования генома мышей
Результаты этапа: Разработаны новые методики для увеличения выхода оплодотворенных яйцеклеток, пригодных для микроинъекций компонентов систем генетического редактирования. Установлено, что в качестве производителей эмбрионов для процедуры редактирования генома мышей наилучшим образом подходят самки мышей инбредной линии FVB, зиготы которых имеют «чистую» незернистую цитоплазму и крупные, четко различимые пронуклеусы, являющиеся легкими мишенями для микроинъекций компонентов системы CRISPR/Cas9. Показано, что эмбрионы FVB имеют более высокую выживаемость после микроинъекции по сравнению с гибридами F1 C57Bl/6 х CBA. С целью получения максимального количества яйцеклеток был оптимизирован процесс гормональной стимуляции самок мышей для суперовуляции. Оптимизированы условия приготовления растворов для микроинъекций, повышающие скорость процесса микроинъекций и выживаемость яйцеклеток после микроинъекций.
2 1 января 2020 г.-31 декабря 2020 г. Развитие технологии редактирования генома мышей
Результаты этапа: Выбрана, освоена и оптимизирована методология криоконсервации эмбрионов мышей на стадии оплодотворенных яйцеклеток, а также процедура оживления (размораживания) эмбрионов из глубокой заморозки с сохранением их жизнеспособности и генетического статуса линии. Усовершенствованная методология базируется на современной технологии витрификации Ориджио (CooperSurgical Company, США), разработанной для криоконсервации ооцитов, эмбрионов и бластоцист человека. Использование разработанного протокола криоконсервации эмбрионов мышей обеспечивает сохранность линий мышей с измененным геномом в течение длительного времени. Освоение технологии оживления криосохраненных эмбрионов позволяет восстанавливать линии мышей с сохранением их генетического статуса. Полученный результат является практически значимым, поскольку помимо длительного хранения, существенно упрощается транспортировка линий мышей с измененным геномом, что в результате приводит к значительному снижению стоимости их содержания, так как в настоящее время приходится поддерживать и размножать значительное число линий мышей.
3 1 января 2021 г.-31 декабря 2021 г. Развитие технологии редактирования генома мышей
Результаты этапа: В ходе выполнения третьего этапа работы в соответствии с плановым заданием были разработаны подходы к созданию мышиной модели, пригодной для исследования патогенеза COVID-19 и испытания препаратов против SARS-CoV2. С этой целью были созданы две генетических конструкции, кодирующие рецептор короновируса SARS-CoV2 белок ACE2 человека (hACE2), а также проведено их встраивание в геном мыши с использованием технологии геномного редактирования CRISPR/Cas9. В результате экспериментов по генетическому редактированию было установлено, что обе эти конструкции встраиваются в геном мыши. Использование конструкции, содержащей между сильным промотором и геном hACE2 сигнал полиаденилирования, окруженный loxP-участками, позволило индуцировать экспрессию hACE2 тканеспецифично, в тех тканях, где экспрессируется ген Cre рекомбиназы. С использованием этой конструкции в рамках совместной работы с учеными из ИБГ РАН была создана линия мышей, гуманизированных по гену hACE2. Таким образом, в результате проведенного за отчетный период исследования была создана линия мышей, пригодных для использования в качестве модели для изучения механизма патогенеза COVID-19 и доклинических испытаний потенциальных антикоронавирусных препаратов.
4 1 января 2022 г.-31 декабря 2022 г. Развитие технологии редактирования генома мышей
Результаты этапа:
5 1 января 2023 г.-31 декабря 2023 г. Развитие технологии редактирования генома мышей
Результаты этапа:
6 1 января 2024 г.-31 декабря 2024 г. Развитие технологии редактирования генома мышей
Результаты этапа:

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".