ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Процессинг теломеразной РНК человека привлекает к себе пристальное внимание многих ученых. Известно, что многие заболевания, характеризующиеся как теломеропатии, ассоциированы с недостатком теломеразной РНК. Последние данные указывают, что процессинг и деградация теломеразной РНК являются строго координированными процессами. Длинный первичный транскрипт теломеразной РНК претерпевает 3’-концевой процессинг, основными участниками которого являются сложные комплексы, привлекающие также и компоненты экзосомы, в результате чего неправильно процессированная или излишняя теломеразная РНК сразу же подвергается деградации. Несмотря на достаточно большой объем знаний о процессинге теломеразной РНК человека, полученный в последние несколько лет, самая первая стадия, а именно образование первичного транскрипта теломеразной РНК, остается неизвестной. Настоящий проект направлен на поиск факторов, участвующих в образовании первичного транскрипта теломеразной РНК человека.
Известно, что правильный процессинг теломеразной РНК осуществляется только в случае транскрипции РНК-полимеразой II. Транскрипт, полученный РНК-полимеразой III, не подвергается процессингу. Более детального анализа структуры промотора, а также других элементов теломеразной РНК, влияющих на процессинг, ранее не проводили. В рамках выполнения этого проекта мы сможем картировать элементы последовательности теломеразной РНК человека важные для ее корректного процессинга. Известно, что процессинг и деградация теломеразной РНК, которую осуществляет экзосома, скоординированы. Белковые комплексы, ассоциированные на разных стадиях процессинга с теломеразной РНК, могут привлекать экзосому или экзонуклеазы, аккуратно подравнивающие 3’-конец. Первая стадия процессинга до сих пор неизвестна. Разработанная нами репортерная система позволит выявить факторы, влияющие именно на первую стадию процессинга теломеразной РНК, а именно те компоненты, которые вносят первичный разрыв в длинный транскрипт.
Ранее мы создали линию клеток со стабильной экспрессией теломеразной РНК человека в составе бицистронной конструкции. Особенности поведения клеток этой линии, а именно флуоресценции GFP, последовательность которого представляет собой второй цистрон, позволяет использовать ее в качестве репортерной для поиска факторов процессинга.
В ходе реализации проекта мы продемонстрировали, что терминация транскрипции и процессинг теломеразной РНК человека осуществляется в промотор-зависимой манере. Промотор гена теломеразной РНК человека определяет дальнейшую судьбу первичного транскрипта. Промотор обеспечивает привлечение мультисубъединичного комплекса Интегратор, который обеспечивает не только транскрипцию гена, но и определяет дальнейшую судьбу первичного транскрипта. Интегратор определяет терминацию транскрипции гена теломеразной РНК человека и, по-видимому, регулирует дальнейший процессинг или деградацию первичного транскрипта. Мы установили, что длина первичного транскрипта теломеразной РНК человека в условиях нокдауна основной субъединицы Интегратора INTS1 составляет 541 нуклеотид. Нокдаун гена DSIF незначительно, но снижает содержание теломеразной РНК и ее предшественника в клетке. Нокдаун гена NELF снижает суммарное содержание теломеразной РНК человека, но не влияет на количество ее предшественника. Удивительно, что нокдаун гена DSIF привел к трехкратному увеличению теломеразной активности.
грант РФФИ |
# | Сроки | Название |
1 | 10 апреля 2017 г.-31 декабря 2017 г. | Поиск факторов процессинга теломеразной РНК человека |
Результаты этапа: Показано, что терминация транскрипции гена теломеразной РНК зависит от промотора. В системе с гетерологичным промотором терминация транскриции ингибирована и происходит накопление более длинных продуктов. Подготовлены образцы для дальнейшего исследования. | ||
2 | 1 января 2018 г.-31 декабря 2018 г. | Поиск факторов процессинга теломеразной РНК человека |
Результаты этапа: В ходе выполнения проекта установлено, что белковый комплекс Интегратор является регулятором транскрипции теломеразной рНК человека. По результатам выполнения проекта опубликована статья в журнале Nucleic Acids Research, принята к публикации статья в журнале Scientific Reports. Результаты были обнародованы на международных конференциях Telomeres in health and human disease, FEBS congress и Postgenome 2018. | ||
3 | 1 января 2019 г.-31 декабря 2019 г. | Поиск факторов процессинга теломеразной РНК человека |
Результаты этапа: В ходе реализации проекта мы продемонстрировали, что терминация транскрипции и процессинг теломеразной РНК человека осуществляется в промотор-зависимой манере. Промотор гена теломеразной РНК человека определяет дальнейшую судьбу первичного транскрипта. Промотор обеспечивает привлечение мультисубъединичного комплекса Интегратор, который обеспечивает не только транскрипцию гена, но и определяет дальнейшую судьбу первичного транскрипта. Интегратор определяет терминацию транскрипции гена теломеразной РНК человека и, по-видимому, регулирует дальнейший процессинг или деградацию первичного транскрипта. Мы установили, что длина первичного транскрипта теломеразной РНК человека в условиях нокдауна основной субъединицы Интегратора INTS1 составляет 541 нуклеотид. Нокдаун гена DSIF незначительно, но снижает содержание теломеразной РНК и ее предшественника в клетке. Нокдаун гена NELF снижает суммарное содержание теломеразной РНК человека, но не влияет на количество ее предшественника. Удивительно, что нокдаун гена DSIF привел к трехкратному увеличению теломеразной активности. |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".