|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Поиск факторов процессинга теломеразной РНК человекаНИР
Searching for human telomerase RNA processing factors
- Руководитель НИР: Рубцова М.П.
- Участники НИР: Василькова Д.П., Нарайкина Ю.В., Юртаева С.В.
- Подразделение: Кафедра химии природных соединений
- Срок исполнения: 10 апреля 2017 г. - 31 декабря 2019 г.
- Номер договора (контракта, соглашения): 17-04-00948\17
- Номер ЦИТИС: АААА-А17-117040510237-7
- Тип: Фундаментальная
- Приоритетное направление научных исследований: Живые системы, медицинские технологии, медицинская химия и новые лекарственные средства
- ПН России: Науки о жизни
- Направление технологического прорыва России: Медицинские технологии и лекарственные средства
-
Рубрики ГРНТИ:
- 34.15.25 Молекулярная биология гена
-
Ключевые слова:
репортер, теломераза, транскрипция, процессинг
transcription, telomerase, processing, reporter -
Описание:
Процессинг теломеразной РНК человека привлекает к себе пристальное внимание многих ученых. Известно, что многие заболевания, характеризующиеся как теломеропатии, ассоциированы с недостатком теломеразной РНК. Последние данные указывают, что процессинг и деградация теломеразной РНК являются строго координированными процессами. Длинный первичный транскрипт теломеразной РНК претерпевает 3’-концевой процессинг, основными участниками которого являются сложные комплексы, привлекающие также и компоненты экзосомы, в результате чего неправильно процессированная или излишняя теломеразная РНК сразу же подвергается деградации. Несмотря на достаточно большой объем знаний о процессинге теломеразной РНК человека, полученный в последние несколько лет, самая первая стадия, а именно образование первичного транскрипта теломеразной РНК, остается неизвестной. Настоящий проект направлен на поиск факторов, участвующих в образовании первичного транскрипта теломеразной РНК человека.
-
Планируемые результаты:
Известно, что правильный процессинг теломеразной РНК осуществляется только в случае транскрипции РНК-полимеразой II. Транскрипт, полученный РНК-полимеразой III, не подвергается процессингу. Более детального анализа структуры промотора, а также других элементов теломеразной РНК, влияющих на процессинг, ранее не проводили. В рамках выполнения этого проекта мы сможем картировать элементы последовательности теломеразной РНК человека важные для ее корректного процессинга. Известно, что процессинг и деградация теломеразной РНК, которую осуществляет экзосома, скоординированы. Белковые комплексы, ассоциированные на разных стадиях процессинга с теломеразной РНК, могут привлекать экзосому или экзонуклеазы, аккуратно подравнивающие 3’-конец. Первая стадия процессинга до сих пор неизвестна. Разработанная нами репортерная система позволит выявить факторы, влияющие именно на первую стадию процессинга теломеразной РНК, а именно те компоненты, которые вносят первичный разрыв в длинный транскрипт.
-
Научный задел:
Ранее мы создали линию клеток со стабильной экспрессией теломеразной РНК человека в составе бицистронной конструкции. Особенности поведения клеток этой линии, а именно флуоресценции GFP, последовательность которого представляет собой второй цистрон, позволяет использовать ее в качестве репортерной для поиска факторов процессинга.
-
Основные результаты:
В ходе реализации проекта мы продемонстрировали, что терминация транскрипции и процессинг теломеразной РНК человека осуществляется в промотор-зависимой манере. Промотор гена теломеразной РНК человека определяет дальнейшую судьбу первичного транскрипта. Промотор обеспечивает привлечение мультисубъединичного комплекса Интегратор, который обеспечивает не только транскрипцию гена, но и определяет дальнейшую судьбу первичного транскрипта. Интегратор определяет терминацию транскрипции гена теломеразной РНК человека и, по-видимому, регулирует дальнейший процессинг или деградацию первичного транскрипта. Мы установили, что длина первичного транскрипта теломеразной РНК человека в условиях нокдауна основной субъединицы Интегратора INTS1 составляет 541 нуклеотид. Нокдаун гена DSIF незначительно, но снижает содержание теломеразной РНК и ее предшественника в клетке. Нокдаун гена NELF снижает суммарное содержание теломеразной РНК человека, но не влияет на количество ее предшественника. Удивительно, что нокдаун гена DSIF привел к трехкратному увеличению теломеразной активности.
- Добавил в систему: Рубцова Мария Петровна
Источник финансирования НИР
| грант РФФИ |
Этапы НИР
| # | Сроки | Название |
| 1 | 10 апреля 2017 г.-31 декабря 2017 г. | Поиск факторов процессинга теломеразной РНК человека |
| Результаты этапа: Показано, что терминация транскрипции гена теломеразной РНК зависит от промотора. В системе с гетерологичным промотором терминация транскриции ингибирована и происходит накопление более длинных продуктов. Подготовлены образцы для дальнейшего исследования. | ||
| 2 | 1 января 2018 г.-31 декабря 2018 г. | Поиск факторов процессинга теломеразной РНК человека |
| Результаты этапа: В ходе выполнения проекта установлено, что белковый комплекс Интегратор является регулятором транскрипции теломеразной рНК человека. По результатам выполнения проекта опубликована статья в журнале Nucleic Acids Research, принята к публикации статья в журнале Scientific Reports. Результаты были обнародованы на международных конференциях Telomeres in health and human disease, FEBS congress и Postgenome 2018. | ||
| 3 | 1 января 2019 г.-31 декабря 2019 г. | Поиск факторов процессинга теломеразной РНК человека |
| Результаты этапа: В ходе реализации проекта мы продемонстрировали, что терминация транскрипции и процессинг теломеразной РНК человека осуществляется в промотор-зависимой манере. Промотор гена теломеразной РНК человека определяет дальнейшую судьбу первичного транскрипта. Промотор обеспечивает привлечение мультисубъединичного комплекса Интегратор, который обеспечивает не только транскрипцию гена, но и определяет дальнейшую судьбу первичного транскрипта. Интегратор определяет терминацию транскрипции гена теломеразной РНК человека и, по-видимому, регулирует дальнейший процессинг или деградацию первичного транскрипта. Мы установили, что длина первичного транскрипта теломеразной РНК человека в условиях нокдауна основной субъединицы Интегратора INTS1 составляет 541 нуклеотид. Нокдаун гена DSIF незначительно, но снижает содержание теломеразной РНК и ее предшественника в клетке. Нокдаун гена NELF снижает суммарное содержание теломеразной РНК человека, но не влияет на количество ее предшественника. Удивительно, что нокдаун гена DSIF привел к трехкратному увеличению теломеразной активности. | ||
Прикрепленные к НИР результаты
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".