ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Основная задача предлагаемого проекта заключается в создании новых высокочувствительных иммуноферментных тест-систем для определения двух токсинов, афлатоксина B1/M1 и окадаиковой кислоты. Для этого будет разработан как традиционный (колориметрический) иммуноферментный анализ с применением как поликлональных, так и моноклональных антител, так и иммуноферментный анализ с хемилюминесцентной детекцией. В последнем случае для повышения аналитической чувствительности на конечной этапе иммуноанализа будет применена реакция усиленной хемилюминесценции, при этом в качестве катализатора этот реакции будет использована анионная пероксидаза сои (ПС). В качестве контрольного фермента будет применена традиционно используемая пероксидаза хрена. В качестве усилителей пероксидаз будут применены 3-(10'-фенотиазинил)пропан-1-сульфонат натрия и 4-морфолинопиридин. В работе также будут исследованы новые производные фенотиазина как усилители пероксидаза-зависимой хемилюминесценции. Часть их будет приобретена в коммерческой сети, другая часть будет синтезирована. Кинетическое изучение процесса окисления производных фенотиазина в присутствии пероксидаз сои и хрена будет осуществлено. Для всех фенотиазинов будет оценен эффект усиливания пероксидаза-зависимой хемилюминесценции. Производные пиридина будут теститрованы как вторичные усилители. Оптимальное сочетание первичного и вторичного усилителей, а также оптимальная концентрация люминола и пероксида водорода, а также кислотности и концентрации буфера будет проводиться с помощью постановки эксперимента на основе метода многофакторного анализа. Проведение предлагаемого исследования должно качественно улучшить иммуноферментный анализ.
Одной из главных задач проекта являлось изучение ферментативного окисления производных фенотиазина в присутствии пероксидаз сои (ПС) и хрена (ПХ). Для этого, используя методы органического синтеза, нами были синтезированы 3-(10'-фенотиазинил)пропан-1-сульфонат натрия и 3-(10'-фенотиазинил)пропионовая кислота в препаративных количествах. Для изучения кинетики производных фенотиазина пероксидом водорода использовались как субстраты следующие вещества: 3-(10'-фенотиазинил)пропан-1-сульфонат натрия (ФТПС), 3-(10'-фенотиазинил)пропионовая кислота (ФПК), 3-(10'-(2'-хлор)-фенотиазинил)пропионовая кислота (ХФПК), перфеназин, этацизин, дипрозин, хлорцизин и нонахлозин. Найдено, что наиболее активными субстратами пероксидазы являются соединения, несущие отрицательно заряженные группы (ФТПС, ФПК, ХФПК), в то время как фенотиазины с положительно заряженными группами субстратами пероксидаз не являлись. Также оценена эффективность производных фенотиазина в реакции усиленной хемилюминесценции. Показано, что максимальным усиливающим эффектом обладали ФПК и ФТПС, которые содержат в своей структуре отрицательно заряженные (в условиях эксперимента) карбокси- и сульфогруппу, соответственно, присоединенные к фенотиазиновому ядру через N-пропильную группировку. Показано, что 4-морфолинопиридин (МП) является наилучшим вторичным усилителем в реакции усиленной хемилюминесценции, где ФТПС применялся как первичный усилитель. На основе пары усилителей ФТПС/МП были разработаны высокочувствительные иммуноферментные тест-системы для определения окадаиковой кислоты и афлатоксинов В1 и М1. Показано, что для подавления эффекта матрикса реальных образцов достаточно использовать разведение экстрактов моллюсков в 10 раз, риса – в 5 раз, соевых бобов – в 10 раз и молока – в 20 раз. Используя разработанные методы, были проанализированы реальные образцы, приобретенные в коммерческих сетях Тайваня, и показано, что продаваемые на Тайване моллюски и молоко являются безопасными для потребителя, а среди 8 образцов риса и 8 образцов соевых бобов, был найден 1 образец с содержанием афлатоксина В1 выше чем максимально допустимый уровень, установленный в Европейском сообществе. Таким образом, вся запланированная работа выполнена в полном объеме. Результаты работы были опубликованы в 7 статьях, а также одна статья отправлена в печать.
Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова | Координатор |
Chung Shan Medical University | Координатор |
грант РФФИ |
# | Сроки | Название |
1 | 15 марта 2011 г.-31 декабря 2011 г. | Новые эффективные усилители пероксидаза-зависимой хемилюминесценции и их применение в высокочувствительном иммуноферментном анализе токсинов |
Результаты этапа: | ||
2 | 1 января 2012 г.-31 декабря 2012 г. | Новые эффективные усилители пероксидаза-зависимой хемилюминесценции и их применение в высокочувствительном иммуноферментном анализе токсинов |
Результаты этапа: | ||
3 | 1 января 2013 г.-31 декабря 2013 г. | Новые эффективные усилители пероксидаза-зависимой хемилюминесценции и их применение в высокочувствительном иммуноферментном анализе токсинов |
Результаты этапа: |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".