![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Целью НИР будет создание экспериментальной мо-дели определения транскриптов гена методом твер-дофазного гибридизационного анализа в формате сэндвич, для чего будут изучены и оптимизированы условия получения модельных фрагментов транс-криптов гена, подобраны пары олигонуклеотидных зондов для их идентификации, оптимизированы ус-ловия получения комплексов транскриптов с олиго-нуклеотидными зондами и их определение методом твердофазного гибридизационного анализа.
The aim of the research will be to create an experimental model for the determination of gene transcripts by solid-phase hybridization analysis in sandwich format, for which the conditions for obtaining model fragments of gene transcripts will be studied and optimized, pairs of oligonucleotide probes for their identification will be selected, the conditions for obtaining transcript complexes with oligonucleotide probes and their determination by solid-phase hybridization analysis.
Будет изучена зависимость эффективности образования комплексов транскриптов с парами олигонуклео-тидных зондов от температуры, состава и молярности буферной смеси, структуры зондов и их взаимного расположения. Определение комплексов будет проводиться методом твердофазного гибридизационного анализа в формате сэндвич с использованием иммобилизованного стрептавидина и щелочной фосфатазы в качестве метки. Будут выбраны оптимальные условия образования комплексов для каждой пары зондов. Будет разработан протокол получения комплексов транскриптов с парами олигонуклеотидных зондов.
Научный задел состоит в наличии опыта теоретических и экспериментальных исследований закономерностей сэндвич гибридизации ДНК бактерий с использованием пар олигонуклеотидных зондов, наличиии положительного опыта дизайна структуры таких зондов, опыта исследований по определению транскриптов генов бактерий.
Будет изучена зависимость эффективности образования комплексов транскриптов с парами олигонуклеотидных зондов от температуры, состава и молярности буферной смеси, структуры зондов и их взаимного расположения. Определение комплексов будет проводиться методом твердофазного гибридизационного анализа в формате сэндвич с использованием иммобилизованного стрептавидина и щелочной фосфатазы в качестве метки. Будут выбраны оптимальные условия образования комплексов для каждой пары зондов. Будет разработан протокол получения комплексов транскриптов с парами олигонуклеотидных зондов.
Хоздоговор, Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук (ИБХФ РАН) |
# | Сроки | Название |
1 | 6 июля 2023 г.-15 декабря 2023 г. | Создание экспериментальной модели определения транскриптов гена ESRI |
Результаты этапа: Проведен анализ представленности альтернативных транскриптов гена ESR1 в базе данных NSBI, выбраны последовательности модельных транскриптов. Разработана экспериментальная модель для определения двух модельных транскриптов гена ESR1 на основе использования одноцепочечного олигонуклеотида и образцов кДНК, выделенных из биологического материала. Разработан протокол получения модельных транскриптов гена ESR1 двух размеров методами ПЦР и транскрипции in vitro. Подобраны структуры четырех пар олигонуклеотидных зондов, комплементарных структуре модельных транскриптов. Проведено изучение условий получения комплексов транскриптов с парами олигонуклеотидными зондами и разработан протокол. Оптимизированы условия определения комплексов модельных транскриптов с олигонуклеотидными зондами методом твердофазного анализа в формате сэндвич и щелочной фосфатазой в качестве метки. |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".