ИСТИНА

В результате выполнения проекта в 2009 и 2010 годах впервые был разработан и успешно опробован флуоресцентный метод, позволивший подтвердить корректность тетрамерной структуры экспрессированных калиевых каналов, а также оценить уровень экспрессии и распределение корректно собранных каналов на поверхности живой клетки. Были также подобраны условия для успешной экспрессии изолированных цитоплазматических доменов этого канала Kv10.2 – Heag2; отработана методика очистки экспрессированных в E.Coli изолированных цитоплазматических доменов этого канала PAS и CNBD для последующих работ по кристаллизации этих доменов; получены структурные данные низкого разрешения. Для изученных калиевых потенциал-зависимых каналов разработана методика определения активных калиевых каналов с использованием меченого аджитоксина, в том числе, разработана методика анализа конкурентного ингибирования. На том же классе каналов была отработана методика определения вероятной пространственной структуры человеческих калиевых каналов (семейств Kv2, Kv10 и Kv11) по гомологии с бактериальным калиевым каналом семейства Shaker Kv1.1, для которого в настоящее время известна 3-х мерная структура. Методами динамического молекулярного моделирования были определены вероятные структуры комплексов вышеперечисленных калиевых каналов человека с аджитоксином из яда скорпиона и созданы модели для изучения конкурентного ингибирования аджитоксина другими блокаторами калиевых каналов. Отрабатывалась также методика определения вероятной пространственной структуры человеческого рецептора по гомологии с известной бактериальной структурой на примере серотонинового 5-НТ-3 рецептора и методики оценки гидрофобности остатков на поверхности белковых структур и влияние гидрофобности растворителя на структуру канал образующих пептидов. Разрабатываемые в проекте методы, сочетающие экспериментальные и теоретические Подходы, направлены на установление структуры ионных каналов человека и выявление молекулярных механизмов связывания лигандов и блокаторов с белками ионных каналов в целях направленного создания медицинских препаратов нового поколения.