|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Процессинг теломеразной РНК человекаНИР
- Руководитель НИР: Рубцова М.П.
- Участники НИР: Василькова Д.П., Логвина Н.А., Нарайкина Ю.В., Савельев Н.В., Скворцов Д.А., Смекалова Е.М.
- Подразделение: Кафедра химии природных соединений
- Срок исполнения: 15 марта 2014 г. - 31 декабря 2016 г.
- Номер договора (контракта, соглашения): 14-04-01637
- Номер ЦИТИС: 01201456133
- Тип: Фундаментальная
- Приоритетное направление научных исследований: Живые системы, медицинские технологии, медицинская химия и новые лекарственные средства
- ПН России: Науки о жизни
- Направление технологического прорыва России: Медицинские технологии и лекарственные средства
-
Рубрики ГРНТИ:
- 31.23.29 Нуклеиновые кислоты и их компоненты
-
Ключевые слова:
процессинг, теломераза
-
Описание:
Проект посвящен изучению процессинга теломеразной РНК человека. Теломеразная РНК человека – один из основных компонентов теломеразного холофермента. Биогенез теломеразы является важным аспектом регуляции активности этого фермента, как в разных типах клеток, так и на разных стадиях клеточного цикла. Мы предполагаем, что регуляция процессинга теломеразной РНК человека может быть одним из ключевых аспектов регуляции активности теломеразы.
-
Abstract:
The investigation of the human telomerase RNA processing is a goal of this project. Human telomerase RNA is one of core components of telomerase holoenzyme. The correct telomerase RNA biogenesis is very important for telomerase activity regulation in different cell types as well as at different stages of cell cycle. We propose that regulation of telomerase RNA regulation may be a key aspect of telomerase activity regulation.
-
Планируемые результаты:
В рамках выполнения проекта будут получены новые данные о процессинге теломеразной РНК человека. Мы установим длину первичного транскрипта, а также выявим структурные элементы, отвечающие за его процессинг.
-
Основные результаты:
Определена длина первичного транскрипта теломеразной РНК человека. Выявлены факторы процессинга теломеразной РНК человека. Установлено, что промотор гена теломеразной РНК человека отвечает за процессинг первичного транскрипта.
- Добавил в систему: Рубцова Мария Петровна
Источник финансирования НИР
| грант РФФИ |
Этапы НИР
| # | Сроки | Название |
| 1 | 1 января 2014 г.-31 декабря 2014 г. | Процессинг теломеразной РНК человека |
| Результаты этапа: В 2014 году мы использовали созданные ранее клеточные линии. Экзогенная экспрессия теломеразной РНК человека в составе бицистронной конструкции позволила нам проследить за судьбой бицистронного транскрипта. Мы предполагали, что фланкирующая 3’-конец теломеразной РНК, последовательность может содержать участок процессинга. В качестве контрольной мРНК, не подвергающейся процессингу, использовали бицистронную мРНК, в состав которой входит кодирующая часть мРНК теломеразной обратной транскриптазы (hTERT). Анализ распределения фрагментов бицистронных мРНК позволил предположить наличие участка внутреннего процессинга теломеразной РНК, а также локализовать (в пределах 100 нуклеотидов) положение первичного разрезания. Для поиска терминатора транскрипции гена теломеразной РНК мы получили конструкции, в которых после участка, кодирующего теломеразную РНК человека с 3’-концевыми последовательностями разной длины, находится IRES-элемент и кодирующая область зеленого флуоресцентного белка (eGFP). Эти конструкции содержат также кассету для экспрессии красного флуоресцентного белка (tdTomato), находящуюся под дополнительным промотором (SFFV). Красный флуоресцентный белок является референсным, т.е. по наличию его флуоресценции в клетках мы контролируем эффективность трансфекции или инфекции, а также можем провести отбор целевых клеток. Зеленый флуоресцентный белок позволяет определить наличие терминатора транскрипции в изучаемой последовательности 3’-области гена теломераной РНК человека. Полученные конструкции были использованы для получения вирусных частиц, которыми мы инфицировали клетки НЕК293. Анализ флуоресценции выявил, что 1100 3’-концевых нуклеотидов гена теломеразной РНК человека ограничивают экспрессию нижестоящего участка. | ||
| 2 | 1 января 2015 г.-31 декабря 2015 г. | Процессинг теломеразной РНК человека |
| Результаты этапа: На данном этапе мы показали, что процессинг теломеразной РНК осуществляется эффективно только в случае ее полноразмерной последовательности, а транскрипция гена теломеразной РНК не заканчивается вблизи границы зрелой формы этой РНК, а продолжается, что приводит к образованию длинных первичных транскриптов вплоть до 3 тпн. | ||
| 3 | 1 января 2016 г.-31 декабря 2016 г. | Процессинг теломеразной РНК человека |
| Результаты этапа: Определена длина первичного транскрипта теломеразной РНК человека. Выявлены факторы процессинга теломеразной РНК человека. Установлено, что промотор гена теломеразной РНК человека отвечает за процессинг первичного транскрипта. | ||
Прикрепленные к НИР результаты
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".