ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
1. Исследования участков внутренней посадки рибосом (УВПР) тобамовирусов, в частности их роль в контроле круга хозяев. 2. Изучение активности транспортного белка вируса табачной мозаики как супрессора умолкания генов и исследовать роль клеточного стрессового белка пектинметилэстеразы в транспорте вирусной РНК и противовирусной клеточной защите. 3. Изучение транспорта вирусной инфекции по растению и роли вирусных и клеточных белков в развитии вирусной инфекции. Картирование сигналов, отвечающих за передвижение транспортных белков поти- и гордеивирусов к плазмодесмам, выяснение природы периферическких телец, содержащих транспортный белок ТБГ3, изучение возможной связи периферических телец с десмотрубочками плазмодесм, а также изучение структуры транспортных нуклеопротеидов Х-вируса картофеля с использованием мутантных форм одного из транспортных белков этого вируса – ТБ1 4. Изучение деталей процессинга репликазы вируса желтухи свеклы (ВЖС), поиск доменов репликазы, необходимых для “заякоривания” в мембранных пузырьках, которые служат местом репликации вирусных РНК и изучение деталей сборки вирионов ВЖС.
Результаты за 2006-2014 год Изучены участки внутренней посадки рибосом (УВПР или IRES) тобамовирусов. Показано, что наибольшей активностью во всех исследованных трансляционных системах эукариот in vitro обладает IRES, предшествующий гену белка оболочки крестоцветного штамма вируса табачной мозаики. Разработана технология одновременной коэкспрессии двух белков с использованием этого УВПР. Показано, что клеточный фермент пектинметилэстераза (ПМЭ) является негативным регулятором транспорта ВТМ. Показано, что непосредственно трансгенозис как стрессовое воздействие для растений приводит к повышению активности стрессового белка пектинметилэстеразы (ПМЭ), и, по-видимому, к повышенной устойчивости этих растений к вирусам. При изучении особенностей трансляционной активации РНК в составе вирионов Х-вируса картофеля открыт ранее не известный феномен линейной дестабилизации спиральной вирусной частицы при избирательном связывании вирусного белка ТБ1 с одним из концов вириона. Картированы функциональные участки в составе транспортного белка ТБГ1 гордеивируса полулатентного вируса мятлика (ПЛВМ), отвечающие за локализацию белка в ядре/ядрышке и взаимодействие с белками растений коилином и фибрилларином. Показано, что в присутствии транспортных белков полулатентного вируса мятлика (ПЛВМ) ТБГ2 и ТБГ3 транспортный белок этого вируса ТБГ1 способен перемещаться внутри клетки в участки, обогащенные плазмодесмами, локализуется внутри плазмодесм и способен транспортироваться в соседние клетки. Показано, что перемещение к плазмодесмам вирусного транспортного белка ТГБ3 ПЛВМ, не требует функционального цитоскелета или секреторной системы, что свидетельствует о вовлечении нетрадиционного пути для внутриклеточного транспорта. Показана роль клеточных белков колилина, фибрилларина и Nt-4/1 в развитии вирусной инфекции. Продолжено изучение клостеровируса желтухи свеклы. Определен точный сайт разрезания папаин-подобной протеиназы этого вируса. Установлены некоторые РНК-связывающие домены вирусных белков. Показано, что вирусная папаин-подобной протеиназа локализвана в структурах, ранее идентифицированных как сайты репликативных белков в клетке. Показано, что экспрессия в растениях Nicotiana benthamiana одного из фрагментов гена репликазы клостеровируса желтухи свеклы (ВЖС) вызывает в клетках растений реструктуризацию эндоплазматического ретикулюма и индукцию гомогенных подвижных глобул. Установлен участок фрагмента, делеция в котором приводит к утрате этой способности.
госбюджет, раздел 0110 (для тем по госзаданию) |
# | Сроки | Название |
1 | 1 января 2014 г.-31 декабря 2014 г. | Изучение структуры и выражения вирусных геномов |
Результаты этапа: Изучены особенности формирования транспортных форм вирусных нуклеопротеидов (вРНП), обеспечивающих распространение вирусной инфекции по растению. В рамках работы по поиску сигнала или необходимого структурного элемента, влияющего на упаковку вирусного генетического материала вРНП, ранее было показано, что присутствие кэп-структуры на 5´-конце нуклеиновой кислоты является важным условием для образования вРНП из вирусной РНК и вирусного белка оболочки (БО) Х-вируса картофеля (ХВК). Было предположено, что кэппирование нуклеиновой кислоты оказывает влияние на создание конформационного сигнала инкапсидации при формировании вРНП. На данном этапе показано, что кэп-структура может быть удалена с предварительно кэпированной молекулы РНК, и это не влияет на возможность и эффективность формирования вРНП. Более того, эффективность сборки вРНП (количество образовавшихся частиц) не падает при декэпировании РНК. Это подтверждает предположения, высказанные ранее, что кэп-структура не является сигналом для инициации формирования вРНП сама по себе. По-видимому, конформационное состояние 5'-конца молекулы, возникающее при кэпировании РНК, является крайне стабильным, и после удаления кэп-структуры конформационный сигнал инкапсидации необходимый для формирования вРНП не изменяется. Изучены особенности некоторых вирусных и клеточных белков, важных для формирования структуры вируионов и влияющих на патогенность вирусов в растениях. Проведены исследования по изучению роли белка р42, ген которого обнаружен в геноме нитевидного аллексивируса – Х-вируса шалота (ХВШ). Показано, что белок, соответствующий по электрофоретической подвижности рекомбинантному белку р42. присутствует в зараженных ХВШ растениях, а в очищенных вирусных препаратах ХВШ присутствует реагирующий с антисывороткой к р42 белок с большей электрофоретической подвижностью (37кДа), по-видимому, за счет частичного протеолиза при выделении вирусного препарата. Методом иммуноэлектронной микроскопии была изучена локализацию белка p42 в составе вирионов ХВШ. Показано, что мечение белка р42 в вирусных частицах является преимущественно специфическим, и что р42 входит в структуру вириона либо являясь компонентом белковой спирали, образованной белком оболочки ХВШ, либо периферически взаимодействуя с вирионами. Продолжено изучение белка Nt-4/1, роль которого в жизнедеятельности растения до сих пор остается неясной. Впервые обнаружено, что белок Nt-4/1 in vitro образует рибонуклеопротеидные комплексы с разными формами РНК, причем с большей эффективностью с РНК, богатыми шпилечными структурами и выпетливаниями. Обнаружен участок связывания - положительно заряженная, кодируемая последним экзоном гена, наиболее консервативная область в C-терминальном домене белка. Получены результаты, свидетельствующие в пользу того, что белок Nt-4/1 образует рибонуклеопротеидные комплексы в клетках проводящего пучка и негативно влияет на распространение по растению вироида веретеновидности клубней картофеля (ВВКК). Проанализирована структура белка Nt-4/1 с помощью компьютерной программы COFACTOR, отбирающей белки со схожими укладками и подобными функциональными доменами и сайтами. Выявлено сходство белка Nt-4/1 и РНК-связывающего белка Saccharomyces cerevisiae She2p. Полученные данные свидетельствует в пользу того, что взаимодействие белка Nt-4/1 с РНК ВВКК, вероятно, происходит примерно также, как и у белка She2p, то есть путем узнавания одноцепочечных выпетливаний и шпилек в дуплексе РНК, однако взаимодействие белка Nt-4/1 с РНК является неспецифичным, поскольку Nt-4/1 также образует комплексы с РНК-субстратами, лишенными таких структур, хотя и с меньшей эффективностью. Изучены функции ядерного белка коилина. Впервые показано, что коилин принимает участие в развитии инфекции растений вирусами различных таксономических групп, усиливая или, напротив, ослабляя патогенность вируса. Изучены характеристики инфекции трансгенных растений с подавленной экспрессией гена коилина при заражении тобравирусом и гордеивирусом. Продолжено изучение репликативного полипротеина 1а вируса желтухи свеклы (ВЖС). Показано, что он содержит гидрофобный домен CR-2, вызывающий при его экспрессии в растениях деградацию эндоплазматического ретикулюма и образование подвижных глобул диаметром 2 мкм. Проведен делеционный анализ "глобуло-образующего" домена CR-2 белка 1а (позиции 1305-1494 белка 1а). Показано, что изученные делеционные варианты сохраняют фенотип дикого типа CR-2 (образование глобул и реструктуризация ЭР вокруг ядра клетки). Получены данные по электронной микроскопии клеток Nicotiana benthamiana, экспрессирующих слитный белок GFP–CR-2. Установлено, что при экспрессии в растениях бинарной конструкции GFP–CR-2 вокруг ядер образуются мультивезикулярные комплексы (одиночные везикулы, окруженные общей мембраной), которые не обнаруживались в неинокулированных | ||
2 | 1 января 2015 г.-31 декабря 2015 г. | Изучение структуры и выражения вирусных геномов |
Результаты этапа: |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".