ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
В 2008-2010 гг. исполнителями проекта получены следующие основные результаты: Для визуализации процесса синапсиса хромосом в женских и мужских мейотических клетках млекопитающих, птиц и растений в большинстве экспериментов была использована техника распластывания (спредирования) мейоцитов. Мы использовали методы электронной микроскопии и метод иммунофлуоресценции с антителами к белкам СК, гистону. gamma H2AX, центромерному белку CENPA и др. для исследования признаков полового диморфизма и мейотического сайлесинга асинаптированного хроматина (MSUC). (1). Выявлены различия в структурной организации и поведении половых бивалентов в профазе I мейоза у самок и самцов двух видов слепушонок рода Ellobius E. talpinus и E tancrei (Ellobius, Mammalian). Половые (ХХ) хромосомы и у самок, и у самцов этих видов изоморфны по картине распределения G – бэндов. Однако, полученные нами результаты позволяют сделать вывод о гетероморфизме половых (ХХ) хромосом у самцов этих видов; (2) Установлены признаки полового диморфизма в динамике гистона ?H2AX у самцов и самок: (а) E tancrei; (б) у межвидовых гибридов E. talpinus и E tancrei; (в) у гибридов E tancrei по множественным робертсоновским (Rb) транслокациям. Мы полагаем, что причина выявленных различий обусловлена различиями механизмов мейотических check-points в мейозе у самок и самцов;. (3). Выявлены закономерности распределения ?H2AX на асинаптированных участках хромосом у гибридных самцов c разной степенью нарушения фертильности; (4). На основании проведенного анализа синапсиса хромосом у самок и самцов гибридов F1 между видами двойниками Е. talpinus (2n=54 NF=54) x Е. tancrei (2n=54; NF=56) выдвинута гипотеза о том, что в процессе дивергенции Е. talpinus и Е. tancrei появление неробертсоновского субметацентрика в кариотипе Е. tancrei обусловлено формированием неоцентромеры в структуре акроцентрика предкового вида, а не инверсией в структуре акроцентрика, как предполагалось ранее; (5).Установлена общая закономерность, касающаяся динамики деградации СК аутосом на стадиях поздней пахитены – диплотены. Удаление основного белка боковых элементов СК SCP3 происходит пунктирно, причем первоначально этот белок удаляется из участков, соответствующих С- и G – бэндам митотических хромосом, т.е. из участков неэффективного синапсиса (участков, не содержащих хиазм); (6), У внутривидовых гибридов и некоторых кариоморф E. tancrei в структуре СК неробертсоновского субметацентрика впервые выявлены дополнительные центромерные сигналы, которые могут располагаться по обе стороны от основной центромеры, что косвенно свидетельствует о наличии в хромосомах этой пары кластеров неоцентромер; (7). Анализ синаптонемных комплексов гибридов F1 форм с 2n = 50 и 2n = 48 выявил формирование закрытого СК пентавалента, образованного тремя метацентриками с монобрахиальной гомологией и двумя акроцентриками. Расхождение хромосом из таких сложных комплексов затруднено вследствие нарушения архитектоники ядер, которое ведет к образованию несбалансированных гамет и резкому снижению плодовитости гибридов. Полученные результаты подтверждают гипотезу о том, что формирование монобрахиально гомологичных метацентрических хромосом происходит независимо в разных популяциях и может рассматриваться как один из способов хромосомного видообразования; (8). СК петухов и кур Gallus Gallus domestics исследованы c помощью метода иммунофлуоресценции. У самок, гетерозиготных по половым (ZW)хромосомам, выявлены морфологические признаки инактивации полового бивалента, типичные для самцов млекопитающих, гетерозиготных по половым (XY) хромосомам; (9). Получены экспериментальные подтверждения гипотезы о том, что минисателлит, ответственный за формирование прицентромерного гетерохроматина (ПЦМС), действительно необходим для формирования СК. Ранее полагали, что ПЦМС должен отсутствовать только в прицентромерной области Y хромосомы мыши, не имеющей гомологов, и поэтому не вступающей в синапсис. Мы доказали это, используя комбинацию методов FISH и иммунофлуоресценции; (10). Проведено иммунофлуоресцентное исследование финальных стадий «демонтажа» латеральных элементов СК на стадиях поздней диплотены-диакинеза.профазы I мейоза ржи Secale cereale. Использованы антитела к основному белку латеральных элементов СК растений – АSY1. Впервые установлено, что в материнских клетках пыльцы ржи спирали, в которые трансформируются латеральные элементы СК на стадии диплотены – диакинеза содержат основной белок СК растений АSY1. Далее АSY1 концентрируется в округлых тельцах, которые выглядят как утолщения тонких спирализованных осей. В материнских клетках пыльцы не удалось выявить динамики АSY1, что, по-видимому, связано с разными методами получения и фиксации препаратов; (11).Сконструирована GFP- линия дрозофилы, пригодная для количественной оценки эпигенетических нарушений хроматина; (12). Установлено, что основное отличие локализации СКАР ДНК в геномах золотистого хомячка и человека состоит в том, что в результате появления в геноме человека GC-богатого семейства H3 уменьшается содержание СКАР ДНК в L1, L2 и H1- изохорах, а именно: с 81% в геноме хомячка до 74% в геноме человека. Важно, что 10% последовательностей СКАР ДНК локализуются в изохоре H3, что коррелирует с предположением о дисперсном расположении СКАР ДНК – вероятных сайтов прикрепления петель хроматина к боковым элементам СК.
грант РФФИ |
# | Сроки | Название |
1 | 1 января 2008 г.-31 декабря 2010 г. | Половой диморфизм в структурной организации и поведении хромосом в мейозе |
Результаты этапа: |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".