|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Роль nrh:хинон оксидоредуктазы 2 в стабилизации и активации опухолевого супрессора р53 при нарушении работы дыхательной цепи митохондрийНИР
- Руководитель НИР: Хуторненко А.А.
- Участники НИР: Александрова А.В., Гараева А.А., Захаров М.П.
- Подразделение: Отдел химии и биохимии нуклеопротеидов
- Срок исполнения: 6 февраля 2014 г. - 31 декабря 2015 г.
- Номер договора (контракта, соглашения): 14-04-32210 мол_а
- Номер ЦИТИС: 01201453277
- Тип: Фундаментальная
- Приоритетное направление научных исследований: Геномика, протеомика. Белковая и генная инженерия. Трансгеноз, генотерапия. Молекулярная медицина.
- ПН России: Науки о жизни
- Направление технологического прорыва России: Медицинские технологии и лекарственные средства
-
Рубрики ГРНТИ:
- 31.27.31 Биохимия опухолей
-
Ключевые слова:
хинон оксидоредуктаза 2, опухолевый супрессор р53, дыхательная цепь митохондрий, взаимодействие nqo2 и р53
-
Описание:
NQO2 контролирует стабильность р53 в клетках, что играет важную роль в регуляции роста, пролиферации и ответа клеток на стресс. В последние 2 года вышли статьи о том, что NQO2 участвует в регуляции стабильности транскрипционного фактора C/EBPalpha, а также киназы AKT1. Тот факт, что NQO2 может взаимодействовать и стабилизировать ключевые регуляторные факторы клетки, делает интересным протеомный масс- спектрометрический анализ взаимодействуюх с NQO2 белков в норме и в условиях стресса. Поэтому основной целью на 2015 год является масс-спектрометрический анализ взаимодействующих с NQO2 белков в клетках в норме и при ингибировании III комплекса дыхательной цепи митохондрий (возможно, также при гамма-облучении). С целью проверки полученных масс-спектрометрических данных необходимо получить адекватных инструмент проверки белковых взаимодействий. Для этого будут доработаны генетические конструкции для бимолекулярной комплиментации флуоресценции. Оптимальные конструкции позволят также оценивать влияние ингибиторов на взаимодействие белков.
-
Основные результаты:
1. Созданы конструкции для бимолекулярной комплиментации флуоресценции с целью изучения взаимодействия NQO2 c р53 и другими белками, а также анализа влияния ингибиторов на такие взаимодействия. 2. Создана конструкция, кодирующая Flag-NQO2 для проведения протеомного масс-спектрометрического анализ белков, взаимодействующих с NQO2 в клетке в норме и под действием стресса.
- Добавил в систему: Хуторненко Анастасия Александровна
Источник финансирования НИР
| грант РФФИ |
Этапы НИР
| # | Сроки | Название |
| 1 | 15 июля 2014 г.-31 декабря 2014 г. | Роль nrh:хинон оксидоредуктазы 2 в стабилизации и активации опухолевого супрессора р53 при нарушении работы дыхательной цепи митохондрий |
| Результаты этапа: Методами иммунофлуоресцентного анализа и бимолекулярной комплиментации флуоресценции подтверждено взаимодействие р53 с NQO2 в клетках карциномы человека в ответ на ингибирование III комплекса дыхательной цепи митохондрий. Ранее в статьях такое взаимодействие было показано методами афинной хроматографии и коиммунопреципитации. Недостаток этих методов заключается в том, что это in vitro методы. С помощью иммунофлуоресцентного анализа и бимолекулярной комплиментации флуоресценции мы можем оценивать взаимодействие белков непосредственно в клетке, а не в лизате, где возможны неспецифические реакции. В результате многочисленных амплификаций с использованием праймеров к NQO2 удалось обнаружить второй продукт амплификации, имеющий меньший размер. Сиквенирование продукта меньшего размера показало, что это укороченная форма NQO2 (NQO2 – isoform2 – CCDS75388.1 – variant 2 – encodes the shorter protein). Длина полноразмерного NQO2 составляет 231 аминокислотных остатка, а укороченного варианта – 193 аминокислотных остатка. Анализ 3D структуры NQO2 показал, что в укороченной форме отсутствует участок, формирующий активный центр NQO2 и участвующий в связывании кофактора FAD. Более того, оказалось, что укороченный NQO2 содержит Leu в 47 положении. Таким образом, вероятно, это каталитически неактивная форма NQO2, имеющая Leu в 47 положении (shortNQO2-L47). Про функции этого белка в клетках ничего неизвестно. | ||
| 2 | 1 января 2015 г.-31 декабря 2015 г. | Роль nrh:хинон оксидоредуктазы 2 в стабилизации и активации опухолевого супрессора р53 при нарушении работы дыхательной цепи митохондрий |
| Результаты этапа: 1. Получены высокоэффективные конструкции для бимолекулярной комплиментации флуоресценции с целью изучения взаимодействия NQO2 c р53 и другими белками, а также анализа влияния ингибиторов на такие взаимодействия. 2. Создана конструкция, кодирующая Flag-NQO2, для проведения протеомного масс-спектрометрического анализа белков, взаимодействующих с NQO2 в клетке в норме и под действием стресса. | ||
Прикрепленные к НИР результаты
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".