ИСТИНА

Цель проведения работы: Разработать экспериментальные подходы к изучению контролируемой экспрессии генов канальных родопсинов на основе создания модельной бицистронной матрицы; получить методами биоинженерии экспрессионные плазмидные векторы, обеспечивающие контролируемую коэкспрессию в нейронах генов канальных родопсинов – катионного (ChR2) и анионного (GtACR2) в составе бицистронной матрицы; разработать экспериментальные подходы к изучению уровня коэкспрессии генов канальных родопсинов в культурах нервных клеток

В результате выполнение проекта должен быть получен и охарактеризован экспериментальный образец плазмидного вектора для контролируемой коэкспрессии канальных родопсинов - анионного родопсина GtACR2 и катионного ChR2, в составе бицистронной матрицы, содержащей оптимизированную последовательность IRES вставки. Экспериментальный образец плазмидного вектора, экспрессирующего канальные родопсины, должен быть наработан в количестве, необходимом для трансфекции культур нервных клеток - от 50 до 100 мкг. Должна быть определена нуклеотидная последовательность генов ChR2 и GtACR2, а также оптимизированной IRES вставки в составе бицистронной матрицы по двум цепям ДНК. Оптимизированная IRES вставка должна обеспечивать 20-кратное превышение уровня экспрессии в нейрональных клетках катионного канального родопсина ChR2 над анионным канальным родопсином GtACR2.

Научно-исследовательские работы на тему: "Получение и исследование рекомбинантных светочувствительных белков-канальных родопсинов, регулирующих электрофизиологическую активность нейронов,для их последующего использования с целью восстановления зрительных функций дегенеративно поврежденной сетчатки при помощи оптогенетических технологий" и "Получение рекомбинантных канальных родопсинов для локализованной экспрессии в нейронах и изучение возбуждающего и тормозного рецептивных полей трансфецированных клеток с целью восстановления зрительных функций дегенеративно поврежденной сетчатки при помощи оптогенетических технологий"

Отчет о НИР, содержащий: а) краткий обзор современной научно-технической литературы по теме исследования контролируемой коэкспрессии целевых генов с использованием бицистронных матриц; б) результаты экспериментальных исследований по получению методами биоинженерии экспрессионных плазмидных векторов, обеспечивающих контролируемую коэкспрессию целевых генов в составе модельной бицистронной матрицы, содержащей IRES вставку; результаты экспериментальных исследований по получению методами биоинженерии экспрессионных плазмидных векторов, обеспечивающих контролируемую коэкспрессию в нейронах генов канальных родопсинов – катионного (ChR2) и анионного (GtACR2) в составе бицистронной матрицы; результаты экспериментальных исследований по разработке экспериментальных подходов к изучению уровня коэкспрессии генов канальных родопснов в культурах нервных клеток. 6.2 При выполнении НИР создана следующая научно-техническая продукция: а) Лабораторный образец плазмидного вектора для контролируемой коэкспрессии канальных родопсинов - анионного родопсина GtACR2 и катионного ChR2, в составе бицистронной матрицы, содержащей оптимизированную последовательность IRES вставки. б) Научно-технический отчет по результатам выполнения НИР.