![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Целью проекта была разработка новых подходов к ингибированию теломеразы -- потенциальной мишени при терапии онкозаболеваний. Наименее известны аспекты динамики работы и биогенеза теломеразы, поэтому получение данных об этих процессах позволит идентифицировать новые мишени для ингибирования теломеразы в клетке.
В ходе выполнения проекта мы создали систему для изучения процессинга теломеразной РНК. При использовании этой системы установлено, что первой стадией процессинга теломеразной РНК человека является расщепление 3'-конца hTR в результате действия эндонуклеазы. В дальнейшем происходит экзонуклеазная деградация теломеразной РНК с образованием процессированной, активной формы. Для проверки подхода ингибирования на основе блокирования динамики работы теломеразы спланированы и синтезированы химерные олигонуклеотиды, содержащие дополнительно химические модификации для фиксирования теломеразы при взаимодействии олигонкулеотида и теломеразной РНК в одной определенной конформации. Дополнительно оптимизирован метод измерения теломеразной активности, что позволило количественно оценивать ингибирование соединениями, содержащими олигонуклеотидные части и исключить ошибки тестирования, связанные с особенностями теломеразных экстрактов и метода. Сравнительный анализ влияния полученных соединений in vivo и in vitro показал, что происходит блокирование сборки теломеразного комплекса.
грант РФФИ |
# | Сроки | Название |
1 | 1 апреля 2011 г.-27 февраля 2012 г. | Новые подходы к ингибированию теломеразы -- потенциальной мишени при терапии онкозаболеваний |
Результаты этапа: Мы создали систему для изучения влияния мутаций в компонетах теломеразы на статус и состояние клетки. Проанализирована линия клеток человека, содержащая мутантную форму теломеразной РНК. Оказалось, что мутация в 3'-концевом участке теломеразной РНК приводит к ее накоплению в клетке, более эффективному созреванию. Кроме того длина теломер в таких клетках в 3-4 раза превышает длину теломер в исходных клетках линии НЕК 293. Мы клонировали в экспрессирующую конструкцию ген теломеразной РНК с мутацией, не влияющей на ее функционирование, но позволяющую направленно отключать экспрессию РНК дикого типа с помощью siRNA. Эта система позволит изучать влияние мутаций на функционирование теломеразы в клетках, которые не будут содержать РНК дикого типа. Механизм процессинга теломеразной РНК человека в настоящее время мало изучен, а систем, позволяющих изучать его в клетках, практически не существует. Созданная нами система позволит пролить свет на еще не известные аспекты биогенеза теломеразы, что позволит идентифицировать новые мишени для ингибирования теломеразной активности. Другим новым подходом в ингибировании теломеразы является блокирование динамики ее работы. Для этого спланированы и синтезированы химерные олигонуклеотиды, содержащие дополнительно химические модификации для фиксирования теломеразы при взаимодействии олигонкулеотида и теломеразной РНК в одной определенной конформации. Дополнительно оптимизированы методы измерения теломеразной активности альтернативные широко используемому методу измерения теломеразной активности на основе амплификации теломерных повторов, что позволит количественно оценивать ингибирование и исключить ошибки тестирования, связанные с природой методов измерения. Понимание механизмов экспрессии и биогенеза теломеразы, ее динамики позволит в дальнейшем расширить терапевтические возможности при лечении онкологических заболеваний. | ||
2 | 1 апреля 2012 г.-27 февраля 2013 г. | Новые подходы к ингибированию теломеразы -- потенциальной мишени при терапии онкозаболеваний |
Результаты этапа: Целью проекта была разработка новых подходов к ингибированию теломеразы -- потенциальной мишени при терапии онкозаболеваний. Наименее известны аспекты динамики работы и биогенеза теломеразы, поэтому получение данных об этих процессах позволит идентифицировать новые мишени для ингибирования теломеразы в клетке. В ходе выполнения проекта мы создали систему для изучения процессинга теломеразной РНК. При использовании этой системы установлено, что первой стадией процессинга теломеразной РНК человека является расщепление 3'-конца hTR в результате действия эндонуклеазы. В дальнейшем происходит экзонуклеазная деградация теломеразной РНК с образованием процессированной, активной формы. Для проверки подхода ингибирования на основе блокирования динамики работы теломеразы спланированы и синтезированы химерные олигонуклеотиды, содержащие дополнительно химические модификации для фиксирования теломеразы при взаимодействии олигонкулеотида и теломеразной РНК в одной определенной конформации. Дополнительно оптимизирован метод измерения теломеразной активности, что позволило количественно оценивать ингибирование соединениями, содержащими олигонуклеотидные части и исключить ошибки тестирования, связанные с особенностями теломеразных экстрактов и метода. Сравнительный анализ влияния полученных соединений in vivo и in vitro показал, что происходит блокирование сборки теломеразного комплекса. |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".